New England Biolabs, T3013L, tampón de lisis sanguínea de ADNg Monarch®

Categorías relacionadas: Extracción y purificación de ADN genómico, Aplicaciones de purificación de ácidos nucleicos, Preguntas frecuentes sobre la purificación de ácidos nucleicos. P: ¿Cuál es la composición de cada tampón incluido en el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin? R: La composición de los tampones es exclusiva. Sin embargo, podemos compartir la siguiente información: Monarch® gDNA Tissue Lysis Buffer.....................Tampón de lisis a base de detergente Monarch® gDNA Cell Lysis Buffer........................Tampón de lisis a base de clorhidrato de guanidinio Monarch® gDNA Blood Lysis Buffer..................Tampón de lisis a base de clorhidrato de guanidinio Monarch® gDNA Binding Buffer...........................Tampón a base de tiocianato de guanidinio Monarch® gDNA Wash Buffer..................................Tampón de lavado a base de etanol Monarch® gDNA Elution Buffer............................10 mM Tris-HCl, pH 9,0, 0,1 mM EDTA P: ¿Qué tamaño de gDNA se puede purificar con el kit de extracción de gDNA Monarch® Spin? R: Suponiendo que se ha utilizado material de entrada de alta calidad, el tamaño de pico del gDNA aislado con este kit varía de 50 a 60 kb. Los números de integridad del ADN (DIN) típicos para el ADNg aislado de sangre, células o tejidos son de alrededor de 9.0. El protocolo de purificación de ADNg de Monarch está optimizado para el aislamiento de ADNg que es más grande que el aislado por otros kits comerciales. Por ejemplo, incluye la elución con un tampón precalentado que mejora la elución de fragmentos más grandes de ADN. Sin embargo, algunos materiales de partida como hisopos bucales o saliva contienen una proporción significativa de células muertas. En esas células, los mecanismos apoptóticos han activado nucleasas que digieren el ADNg a fragmentos más cortos. El tamaño del pico del ADNg aislado de dichas muestras suele estar en el rango de 20-40 kb. P: ¿Puedo omitir el paso de digestión con ARNasa A del protocolo? R: Sí, el procedimiento de purificación de ADNg de Monarch ha sido diseñado para minimizar la cantidad de ARN que se copurifica. Los porcentajes típicos de ARN presentes en los eluidos de ADNg de Monarch cuando se omite el paso de digestión con ARNasa A son del 1 % (protocolo de sangre), del 10 % (protocolo de células) y del 1 % al 5 % (protocolo de tejidos). Estas bajas cantidades no suelen afectar a la mayoría de las aplicaciones posteriores. Si se incluye el paso de digestión con ARNasa A en cada protocolo, las cantidades finales de ARN copurificadas con el ADNg son del 0 % al 1 %, cantidades que no son detectables con la mayoría de los métodos. P: ¿Importa qué anticoagulante se utiliza en las muestras de sangre? R: No. El aislamiento de ADNg de sangre con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin funciona bien con sangre tratada con EDTA, citrato o heparina.