New England Biolabs, T3056L, tampón de elución de ADNg Monarch® II

Categorías relacionadas Extracción de ADN de alto peso molecular, Extracción y purificación de ADN genómico, Purificación de ácidos nucleicos Preguntas frecuentes P: ¿Qué sistema de medición es el más adecuado para evaluar la concentración de ADN de alto peso molecular? R: Según nuestra experiencia, y a diferencia de lo que se cree, medir la concentración de ADN de alto peso molecular con Qubit® no es el método más preciso. Las mediciones de DO proporcionan valores de concentración más precisos, pero debido a la viscosidad de las muestras de ADN de alto peso molecular, se requieren varias réplicas. Las lecturas de Qubit suelen subestimar la cantidad de ADN de alto peso molecular; en el caso del ADN genómico aislado con columnas de centrifugación de sílice (normalmente de 20 a 80 kb), Qubit proporciona lecturas de concentración de ADN entre un 10 % y un 15 % inferiores a las obtenidas con espectrofotómetro. La capacidad del colorante intercalante para teñir el ADN disminuye al aumentar la longitud del fragmento de ADN, lo que da como resultado una diferencia aún mayor entre los valores de Qubit y de DO cuando se trabaja con ADN de alto peso molecular. Las diferencias pueden ser de hasta un 35 %, o incluso superiores en algunos casos, lo que resulta en una subestimación significativa de la concentración de ADN. P: Tengo problemas para disolver mi ADN de alto peso molecular (ADN de alto peso molecular) después del aislamiento. ¿Tienen algún consejo para aumentar la solubilidad? R: El ADN de alto peso molecular (ADN de alto peso molecular) es notoriamente difícil de disolver. Cuando las muestras de ADN están muy concentradas o contienen ADN de peso molecular ultraalto, disolverlo puede ser aún más difícil. En general, cuanto más compactado esté el ADN, más difícil será disolverlo. Las perlas de vidrio utilizadas en los kits de extracción de ADN de alto peso molecular Monarch proporcionan una gran superficie alrededor de la cual el ADN se enrolla, lo que generalmente sirve para mantener el ADN en una conformación abierta, facilitando su disolución. Sin embargo, la solubilidad aún puede ser un problema. A continuación, se ofrecen algunos consejos para maximizar la solubilidad de su ADN al trabajar con los kits de extracción de ADN de alto peso molecular Monarch: Intente minimizar el tiempo que el ADN permanece unido a las perlas sin líquido. Después de eliminar el líquido de las perlas, agregue el siguiente tampón sin demora. Cuanto más tiempo se seque el ADN en las perlas, más compacto estará y más difícil será disolverlo posteriormente. Al unir el ADN a las perlas, no invierta la muestra más tiempo del recomendado. Cuanto más tiempo pase el ADN enrollado alrededor de las perlas, más se compactará y más difícil será disolverlo posteriormente. Consulte nuestra guía de uso, "Homogeneización de muestras de ADN de alto peso molecular (ADN HMW) tras la elución", para obtener más consejos sobre la homogeneización de ADN HMW tras la elución.