New England Biolabs, T4130L, Kit de limpieza de ADN para PCR Monarch® Mag (5 μg)

Preguntas frecuentes sobre la purificación de ácidos nucleicos P: ¿Puedo comprar Monarch® Mag Beads M2 adicionales para Monarch Mag PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg) (NEB #T4130) por separado? R: Sí, las perlas magnéticas (NEB #T4105) para Monarch Mag PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg) también están disponibles por separado. P: ¿Puedo usar agua para eluir el ADN cuando uso Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup Kits (5 μg) (NEB #T4130)? R: Sí, se puede usar agua para eluir el ADN. Para una máxima eficiencia de elución, asegúrese de que el agua esté libre de nucleasas y que el pH esté entre 7 y 8,5. El agua Milli-Q™ suele ser ligeramente ácida, lo que requiere un ajuste del pH. Si va a almacenar el ADN a largo plazo, le recomendamos usar el tampón Monarch EY (tampón de elución de ADN) suministrado, que contiene 0,1 mM de EDTA. P: ¿Puedo usar el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.° T4130) para la selección de tamaño? R: El kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.° T4130) está diseñado para la purificación y la limpieza, y elimina eficazmente cebadores, nucleótidos y otros componentes de la reacción. Sin embargo, este kit no es compatible con aplicaciones de selección de tamaño. P: ¿Es necesario que las perlas magnéticas del kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.° T4130) estén completamente secas antes de eluir el ADN? R: El secado adecuado de las perlas magnéticas es un paso fundamental para garantizar una recuperación y pureza óptimas del ADN. Las perlas deben secarse lo suficiente para eliminar cualquier líquido visible que fluya libremente, manteniendo al mismo tiempo un aspecto brillante de color marrón oscuro. Esto indica que están listos para la elución. Evite secar demasiado las perlas, ya que puede afectar negativamente la recuperación de ADN. Las perlas demasiado secas suelen tener un aspecto mate y marrón claro, y pueden ser más difíciles de resuspender. P: ¿Es compatible el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.º T4130) con un flujo de trabajo automatizado? R: Sí, el kit es compatible con flujos de trabajo e instrumentos automatizados. Se puede integrar en varias plataformas de manipulación de líquidos para una limpieza de ADN de alto rendimiento. El formato de perlas magnéticas permite una fácil automatización de los pasos de unión, lavado y elución. P: ¿Es compatible el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.º T4130) con muestras de ARN? R: Aunque el ARN se puede recuperar utilizando el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.º T4130), los tampones y protocolos no están diseñados para condiciones libres de ARNasa ni para una purificación fiable del ARN. Por lo tanto, no recomendamos usar este kit para la limpieza de ARN. P: ¿Cuál es la composición de cada tampón proporcionado con el Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg) (NEB #T4130)? R: La composición de los tampones es exclusiva. Sin embargo, podemos compartir lo siguiente: Monarch Buffer BZ: tampón de unión a base de guanidina e isopropanol Monarch Buffer WZ: tampón de lavado a base de etanol Monarch Buffer EY: tampón de elución Tris 10 mM, EDTA 0,1 mM, pH 8,5 P: ¿Cuál es la capacidad de unión máxima de las Monarch® Mag Beads M2 proporcionadas con el Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg) (NEB #T4130)? R: Las Monarch® Mag Beads M2 tienen una capacidad de unión de hasta 5 µg de ADN por preparación cuando se utiliza el flujo de trabajo estándar (20 µl de perlas) en la aplicación de limpieza y purificación de ADN. Esta capacidad es flexible y se puede ajustar aumentando o disminuyendo el volumen de microesferas utilizadas. Existen protocolos que permiten aumentar o reducir el tamaño de la reacción, lo que permite introducir ADN por debajo o por encima de 5 µg, según las necesidades experimentales. P: ¿Cuál es el volumen mínimo de tampón de elución que se puede utilizar con el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 µg) (NEB n.º T4130)? R: Para flujos de trabajo estándar, recomendamos un volumen de elución de 25 a 50 µl al utilizar este kit. Para flujos de trabajo automatizados, generalmente se puede utilizar el mismo rango de elución (25 a 50 µl); sin embargo, la compatibilidad depende de la plataforma de automatización específica. Recomendamos consultar las especificaciones del instrumento para asegurarse de que el volumen seleccionado cumpla con los requisitos de volumen mínimo tolerable de la plataforma. P: ¿Qué tamaño de ADN se puede purificar con el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 µg) (NEB n.º T4130)? A: La recuperación de ADN desde tan solo 50 pb hasta tan grande como 25 kb se puede lograr con el Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg) (NEB #T4130). La eficiencia disminuye con ADN más largo debido a la unión más fuerte a la matriz. La recuperación de ADN ≥ 15 kb se puede mejorar modificando el método de elución, utilizando tampón de elución calentado (50 °C) y extendiendo los tiempos de incubación. Para una recuperación óptima de fragmentos grandes de ADN, siga el protocolo específico disponible. P: ¿Qué tipos de muestras de ADN son compatibles con el Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup Kit (5 μg) (NEB #T4130)? ¿Hay protocolos específicos disponibles? R: Sí, el kit es compatible con una amplia gama de tipos de ADN distintos del ADN lineal, incluyendo: Oligonucleótidos y fragmentos cortos de ADN: Tanto oligonucleótidos monocatenarios como bicatenarios se pueden recuperar utilizando este kit. Consulte el Protocolo para la limpieza de oligonucleótidos utilizando el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® Mag (5 μg) (NEB n.º T4130). ADN circular: Tanto el ADN circular monocatenario como el bicatenario se pueden purificar utilizando el Protocolo para la limpieza estándar de ADN y PCR en un flujo de trabajo manual utilizando el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch Mag (5 μg) (NEB n.º T4130). Fragmentos grandes de ADN (>25 kb), incluido el ADN genómico: Estos se pueden purificar de manera efectiva utilizando un Protocolo para la limpieza de ADN genómico (ADNg) utilizando el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® Mag (5 μg) (NEB n.º T4130). Productos RCA: Las reacciones de amplificación por círculo rodante (RCA) generalmente producen una alta concentración de ADN y se pueden purificar utilizando el Protocolo para la limpieza de la reacción RCA utilizando el kit de limpieza de ADN y PCR Monarch® Mag (5 μg) (NEB n.º T4130). Para obtener los mejores resultados, utilice el protocolo adecuado en nuestro sitio web, adaptado a su tipo de muestra. P: Al utilizar el kit Monarch® Mag PCR & DNA Cleanup (5 μg) (NEB n.° T4130), tengo microesferas residuales en el ADN eluido. ¿Cómo puedo evitar el arrastre de microesferas? R: Utilice un imán potente para asegurar una separación eficaz de las microesferas magnéticas. Al retirar el sobrenadante, tenga cuidado de no alterar el pellet de microesferas. Si el pellet se rompe accidentalmente, repita el paso de separación magnética para permitir que las microesferas se reagreguen por completo antes de proceder a la extracción del sobrenadante.