Promega, GA2001, Bioensayo de VEGF

Un bioensayo de VEGF más simple y consistente
Precalificado según las directrices ICH
Ensayo basado en el mecanismo de acción
No se requiere cultivo celular primario
Se suministra en un cómodo formato para descongelar y usar; también disponible en formato de modelo de propagación celular (CPM)
Presupuesto:
Células KDR/NFAT-RE HEK293 GA109A 1 × 0,5 ml
Suero fetal bovino J121A 1 × 4 ml
DMEM con 4,5 g/L de glucosa, L-glutamina, piruvato de sodio J236A 1 × 60 ml
Tampón de ensayo de luciferasa Bio-Glo™ G719A 1 × 10 ml
Sustrato de ensayo de luciferasa Bio-Glo™ G720A 1 × 1 vial
Células KDR/NFAT-RE HEK293 GA109A 5 × 0,5 ml
Suero fetal bovino J121A 5 × 4 ml
DMEM con 4,5 g/L de glucosa, L-glutamina, piruvato de sodio J236A 5 × 60 ml
Tampón de ensayo de luciferasa Bio-Glo™ G719A 5 × 10 ml
Sustrato de ensayo de luciferasa Bio-Glo™ G720A 5 × 1 vial
Células KDR/NFAT-RE HEK293 (CPM) GA108A 2 × 1 ml
VEGF J237A recombinante 1 × 10 μg
El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es una importante proteína de señalización secretada por células epiteliales, células tumorales y macrófagos. Desempeña numerosas funciones, como la estimulación de la angiogénesis, el aumento de la permeabilidad vascular, la mejora de la invasión y supervivencia tumoral, y la inhibición de la respuesta antitumoral en las células Treg. Existen varios subtipos de receptores de VEGF: VEGFR1, VEGFR2 y VEGFR3. VEGFR2 (también conocido como KDR) media en casi todas las respuestas celulares conocidas de los receptores de VEGF. El VEGF se presenta en cuatro isoformas: VEGF-121, VEGF-165, VEGF-189 y VEGF-206, de las cuales VEGF-121 y VEGF-165 son formas difusibles. VEGF-165 es la isoforma predominante en el organismo.
Todos los miembros de la familia VEGF estimulan la respuesta celular al unirse a los receptores de la tirosina quinasa, concretamente VEGFR-1 (Flt-1) y VEGFR-2 (Flk-1/KDR). Cuando el VEGF se une al KDR, el receptor se dimeriza y se activa mediante transfosforilación.
El bioensayo de VEGF es un ensayo bioluminiscente basado en células que mide la estimulación e inhibición del KDR (VEGFR-2) por VEGF utilizando la luciferasa como indicador. Este ensayo supera muchas de las limitaciones de los ensayos actuales de proliferación de células endoteliales y puede utilizarse para el descubrimiento y desarrollo de nuevas terapias biológicas dirigidas a inducir o inhibir la respuesta del VEGF.
Las células sensibles al VEGF se han diseñado para expresar el elemento de respuesta (RE) aguas arriba de
luc2P
, así como el receptor exógeno de VEGF. Cuando el VEGF se une a las células sensibles a VEGF, el receptor transduce señales intracelulares, lo que produce luminiscencia. La señal bioluminiscente se detecta y cuantifica mediante el sistema de ensayo de luciferasa Bio-Glo™ (n.° de cat. G7940) y un luminómetro estándar como el sistema GloMax® Discover (n.° de cat. GM3000).
El VEGF recombinante puede utilizarse como ligando de control positivo en el bioensayo de VEGF (Cat. n.° GA2001, GA2005). El VEGF-165 humano, aminoácidos Ala27–Arg191 (n.° de acceso AAM03108), tiene una masa molecular prevista de 19 kDa y se suministra en una solución de ácido cítrico 5 mM y NaHPO4 5 mM.
4
, 0,15 M NaCl (pH 4,0) y a una concentración de 200 μg/ml.