Promega, N2761, vectores de ligasa NanoBRET® TE E3

Vectores de fusión de ligasa E3 NanoLuc® y vectores de expresión DDB1 para ensayos de ligasa E3 NanoBRET® TE
Vectores listos para transfección para expresar la luciferasa NanoLuc® fusionada a las proteínas CRBN o VHL de la ligasa E3
Vector listo para la transfección para expresar la proteína DDB1
Utilice estos vectores con ensayos de ligasa E3 intracelular NanoBRET® TE, CRBN o VHL, para medir la interacción del objetivo de la ligasa E3
Presupuesto:
Vector de fusión NanoLuc®-CRBN N274A 1 × 20 μg
Vector de fusión VHL-NanoLuc® N275A 1 × 20 μg
Vector de expresión DDB1 N276A 3 × 20 μg
La degradación de proteínas mediante moléculas pequeñas, como los PROTAC o los pegamentos moleculares, se rige por múltiples pasos. Los pasos iniciales implican la entrada del compuesto degradador de moléculas pequeñas en la célula, seguida de la unión a la ubiquitina ligasa E3 y a la proteína diana.
Ensayos de ligasa E3 intracelular NanoBRET® Target Engagement (TE)
Permiten la medición en células vivas de la unión o afinidad de compuestos por una proteína ubiquitina ligasa E3, Cereblon (CRBN) o un supresor tumoral de la enfermedad de von Hippel-Lindau (VHL). Además, los ensayos pueden utilizarse para cuantificar la disponibilidad intracelular del compuesto. Estos ensayos se basan en la tecnología NanoBRET®, una técnica de transferencia de energía diseñada para medir la proximidad molecular en células vivas.
Los vectores de fusión de la ligasa E3 NanoLuc® están diseñados para actuar como donantes de energía en el ensayo intracelular de la ligasa E3 NanoBRET® TE. El aceptor de energía en estos ensayos es un trazador NanoBRET® fluorescente permeable a las células que se une a la proteína de fusión de la ligasa E3 NanoLuc®. La proximidad del trazador a NanoLuc® en la fusión de la ligasa E3 produce una señal NanoBRET®. La adición de compuestos a las células que se unen a la ligasa E3 produce una disminución dosis-dependiente de la señal NanoBRET®. Estos datos permiten cuantificar la afinidad intracelular de los compuestos degradadores por una proteína diana de la ligasa E3.