Promega, N2931, NanoBRET® TE Ensayos intracelulares de ligasa E3

Medición de la interacción de la ligasa E3 con el objetivo y la disponibilidad intracelular del compuesto
Cuantificar la afinidad intracelular de compuestos por las ligasas de ubiquitina CRBN o VHL E3 en células vivas
Ejecute un flujo de trabajo simple para calcular la disponibilidad intracelular de compuestos, una medida de permeabilidad, para ayudar en la priorización de compuestos.
Ensayos escalables que utilizan protocolos de solo adición
Presupuesto:
Sustrato NanoBRET® Nano-Glo® N157A 1 × 50μl
Tampón de dilución trazador N219A 1 × 5 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235A 1 × 17 μl
Vector de fusión NanoLuc®-CRBN N274A 1 × 20 μg
Vector de expresión DDB1 N276A 1 × 20 μg
NanoBRET® TE Tracer CRBN N290A 1 × 30μl
Sustrato NanoBRET® Nano-Glo® N157C 1 × 330μl
Tampón de dilución trazador N219A 1 × 5 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235B 1 × 110 μl
Vector de fusión NanoLuc®-CRBN N274A 1 × 20 μg
Vector de expresión DDB1 N276A 3 × 20 μg
NanoBRET® TE Tracer CRBN N290B 1 × 300μl
NanoBRET® Nano-Glo® Sustrato N157D 1 × 3,3 ml
Tampón de dilución trazador N219B 1 × 50 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235C 1 × 1,1 ml
NanoBRET® TE Tracer CRBN N290B 10 × 300μl
ADN portador de transfección E488A 1 × 20 μg
Sustrato NanoBRET® Nano-Glo® N157A 1 × 50μl
Tampón de dilución trazador N219A 1 × 5 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235A 1 × 17 μl
Vector de fusión VHL-NanoLuc® N275A 1 × 20 μg
NanoBRET® TE Tracer VHL N292A 1 × 30μl
ADN portador de transfección E488B 1 × 100 μg
Sustrato NanoBRET® Nano-Glo® N157C 1 × 330μl
Tampón de dilución trazador N219A 1 × 5 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235B 1 × 110 μl
Vector de fusión VHL-NanoLuc® N275A 1 × 20 μg
NanoBRET® TE Tracer VHL N292B 1 × 300 μl
NanoBRET® Nano-Glo® Sustrato N157D 1 × 3,3 ml
Tampón de dilución trazador N219B 1 × 50 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235C 1 × 1,1 ml
NanoBRET® TE Tracer VHL N292B 10 × 300μl
La degradación de proteínas a través de moléculas pequeñas como los PROTAC o los pegamentos moleculares se rige por múltiples pasos.
Los pasos iniciales implican la entrada del compuesto degradador de moléculas pequeñas en la célula, seguido de la unión a la E3.
ubiquitina ligasa y proteína diana. Los ensayos de ligasa E3 intracelular NanoBRET® TE cuantifican tanto
Compromiso con el objetivo y disponibilidad de compuestos degradadores intracelulares.
Estos ensayos se basan en la tecnología NanoBRET®, una técnica de transferencia de energía diseñada para medir la
proximidad en células vivas. S
En concreto, el NanoBRET®
Los ensayos de ligasa E3 intracelular de compromiso con el objetivo (TE) permiten la medición en células vivas de la afinidad del compuesto degradador por una proteína ligasa de ubiquitina E3, Cereblon (CRBN) o un supresor de tumores de la enfermedad de von Hippel-Lindau (VHL).
I
Además, los ensayos se pueden utilizar para cuantificar la disponibilidad intracelular de un compuesto.
Como los degradadores heterobifuncionales como los PROTAC suelen tener un peso molecular alto, pueden sufrir una degradación celular deficiente.
Permeabilidad o disponibilidad intracelular. Mediante un flujo de trabajo sencillo que incluye dos modos de ensayo únicos (célula viva y célula permeabilizada), el NanoBRET®
Los ensayos de ligasa TE E3 se pueden utilizar para calcular la disponibilidad intracelular de un compuesto degradador.