Promega, NP5150, NanoBRET® Sistemas de selectividad CDK de compromiso con el objetivo

Selectividad de compuestos del perfil para quinasas dependientes de ciclina (CDK) en células vivas
Determinar la afinidad y ocupación del compuesto o inhibidor contra hasta 16 CDK
Cada sistema de selectividad de CDK NanoBRET® TE utiliza un flujo de trabajo de microplaca simple, de solo adición, y proporciona un panel de vectores de CDK (A o B) y un ensayo de quinasa NanoBRET® TE.
Dos paneles de vectores NanoBRET® TE CDK listos para transfección (A y B) con 8 emparejamientos individuales del vector de fusión CDK-NanoLuc® con ADN ciclina/transportador
Presupuesto:
Mezcla vectorial CDK1/CCNB1 NP501A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK2/CCNE1 NP502A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK3/CCNE1 NP503A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK4/CCND3 NP504A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK5/CDK5R1 NP505A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK6/CCDN1 NP506A 1 × 120 μl
Mezcla de vector portador CDK7/NP507A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK9/CCNK NP508A 1 × 120 μl
ADN portador de transfección E488B 1 × 100 μg
Sustrato NanoBRET® Nano-Glo® N157C 1 × 330μl
Tampón de dilución trazador N219A 1 × 5 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235B 1 × 110 μl
Trazador NanoBRET® K-10 N264B 1 × 300 μl
Vector de fusión LIMK1-NanoLuc® NV339A 1 × 20 μg
Mezcla vectorial CDK1/CCNB1 NP501A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK2/CCNE1 NP502A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK3/CCNE1 NP503A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK4/CCND3 NP504A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK5/CDK5R1 NP505A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK6/CCDN1 NP506A 1 × 120 μl
Mezcla de vector portador CDK7/NP507A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK9/CCNK NP508A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK10/CCNL2 NP511A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK14/CCNY NP512A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK15/CCNY NP513A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK16/CCNY NP514A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK17/CCNY NP515A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK18/CCNY NP516A 1 × 120 μl
Mezcla de vector portador CDKL2/NP517A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK20/CCNH NP518A 1 × 120 μl
ADN portador de transfección E488B 1 × 100 μg
Sustrato NanoBRET® Nano-Glo® N157C 1 × 330μl
Tampón de dilución trazador N219A 1 × 5 ml
Inhibidor extracelular NanoLuc® N235B 1 × 110 μl
Trazador NanoBRET® K-10 N264B 1 × 300 μl
Vector de fusión LIMK1-NanoLuc® NV339A 1 × 20 μg
Mezcla vectorial CDK10/CCNL2 NP511A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK14/CCNY NP512A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK15/CCNY NP513A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK16/CCNY NP514A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK17/CCNY NP515A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK18/CCNY NP516A 1 × 120 μl
Mezcla de vector portador CDKL2/NP517A 1 × 120 μl
Mezcla vectorial CDK20/CCNH NP518A 1 × 120 μl
Los sistemas de selectividad de CDK NanoBRET® Target Engagement (TE) miden cuantitativamente la afinidad y ocupación intracelular de compuestos frente a dos paneles de 8 CDK cada uno, lo que permite medir hasta 16 CDK en un solo experimento. Cada panel de vectores contiene 8 tubos individuales de vectores de fusión CDK-NanoLuc® premezclados con un vector de expresión de ciclina o ADN transportador para una transfección óptima.
Los sistemas de selectividad CDK se basan en la
Tecnología NanoBRET® TE
, un método de transferencia de energía por resonancia de bioluminiscencia (BRET) que utiliza la luciferasa NanoLuc®, pequeña y extremadamente brillante, como donante de energía y un trazador NanoBRET® TE permeable a las células como aceptor de energía. Los sistemas de selectividad CDK utilizan un formato de placa multipocillo de solo adición con un único ensayo de cinasa NanoBRET® TE.
En este estudio, se utilizó el método NanoBRET® TE para perfilar un conjunto de 46 inhibidores de CDK clínicamente avanzados y moléculas herramienta en células vivas. Los resultados confirmaron la unión de compuestos clínicos avanzados y revelaron nuevas interacciones fármaco-CDK. Estos nuevos hallazgos ofrecen la posibilidad de reutilizar fármacos para miembros de la familia CDK menos estudiados. Este artículo destaca la importancia de determinar la selectividad de fármacos en la familia CDK en células vivas. Los sistemas de selectividad de CDK NanoBRET® TE ampliaron este trabajo, simplificando el flujo de trabajo para utilizar un único ensayo NanoBRET® TE (K-10) y paneles de vectores CDK listos para usar.
Wells, CI
y otros.
(2020) Cuantificación de la selectividad del inhibidor de CDK en células vivas.
Comisión Nacional
11
, 2743.