Qiagen, 12162, Kit Maxi de Plásmidos QIAGEN (10)

10 puntas QIAGEN 500, reactivos, tampones

Características

- Pureza equivalente a centrifugación en gradiente de 2 x CsCl
- Altos rendimientos de ADN plasmídico
- Preparaciones rentables
- LyseBlue para una lisis óptima y un rendimiento máximo de ADN

Detalles del producto

Los kits de plásmidos QIAGEN proporcionan puntas de intercambio aniónico con flujo por gravedad para la purificación de ADN plasmídico apto para transfección. La clarificación del lisado y la precipitación con isopropanol se realizan mediante centrifugación.

El QIAGEN Plasmid Mega Kit (n.° de cat. 12181) y el QIAGEN Plasmid Giga Kit (n.° de cat. 12191) pueden utilizarse con los cartuchos QIAfilter Mega-Giga (n.° de cat. 19781) como paso opcional del protocolo para la rápida purificación de lisados ​​bacterianos mediante filtración en lugar de centrifugación. Consulte más información sobre el principio a continuación.

Actuación

Los kits de plásmidos QIAGEN utilizan puntas de intercambio aniónico QIAGEN de flujo por gravedad para una purificación eficiente del ADN plasmídico. Se purifican hasta 10 mg (giga), 2,5 mg (mega), 500 µg (maxi), 100 µg (midi) y 20 µg (mini) de ADN plasmídico de alto número de copias a partir de cultivos (los volúmenes de cultivo dependen del número de copias del plásmido, el tamaño del inserto, la cepa huésped y el medio de cultivo). El ADN plasmídico purificado con los kits de plásmidos QIAGEN es ideal para aplicaciones como la transfección (véase la figura "Eficiencia de la transfección frente al método de purificación de plásmidos"), la clonación y la transcripción in vitro.

Principio

Características: Kit mini de plásmido
Aplicaciones: Transfección, clonación, secuenciación, secuenciación capilar, etc.
Volumen de cultivo/material de partida: 3–10 ml de volumen de cultivo
Volumen de elución: Variable
Tipo de plásmido: ADN cósmido de alto número de copias, de bajo número de copias
Procesamiento: Manual (flujo por gravedad)
Muestra por ejecución: 1 muestra por ejecución
Tecnología: Tecnología de intercambio aniónico
Tiempo por carrera: 80 min
Rendimiento: <20 µg

La exclusiva resina de intercambio aniónico de las puntas QIAGEN se desarrolló exclusivamente para la purificación de ácidos nucleicos. Sus excepcionales propiedades de separación dan como resultado una pureza del ADN equivalente o superior a la obtenida mediante dos rondas sucesivas de centrifugación en gradiente de CsCl. Las puntas QIAGEN preempaquetadas funcionan por gravedad y nunca se secan, lo que minimiza el tiempo de preparación de plásmidos. Todo el sistema de purificación de plásmidos QIAGEN evita el uso de sustancias tóxicas como fenol, cloroformo, bromuro de etidio y CsCl, minimizando así los riesgos para el usuario y el medio ambiente.

Como paso opcional del protocolo para la rápida purificación de lisados ​​bacterianos mediante filtración en lugar de centrifugación, puede utilizar los cartuchos QIAfilter Mega-Giga (n.º de cat. 19781), que funcionan con vacío interno para purificar eficazmente incluso grandes volúmenes de lisado bacteriano con el mínimo esfuerzo. El protocolo está disponible en el manual.

Procedimiento

Con los kits de plásmidos QIAGEN, los lisados ​​bacterianos se clarifican mediante centrifugación. El lisado clarificado se carga en la punta de intercambio aniónico, donde el ADN plasmídico se une selectivamente en condiciones adecuadas de baja salinidad y pH. El ARN, las proteínas, los metabolitos y otras impurezas de bajo peso molecular se eliminan mediante un lavado con sal media, y el ADN plasmídico puro se eluye en un tampón con alta salinidad (véase el diagrama de flujo "Procedimientos del kit de plásmidos QIAGEN"). El ADN se concentra y desaliniza mediante precipitación con isopropanol y se recoge mediante centrifugación.

Aplicaciones

- Transfección
- Clonación
- PCR
- Transcripción in vitro

El ADN plasmídico purificado con los kits de plásmidos QIAGEN es muy adecuado para su uso en aplicaciones como: