Qiagen, 12224-50, Kit microbiano DNeasy UltraClean (50)

Para el aislamiento de ADN de alta calidad de cultivos microbianos

Características

- Purificación rápida y sencilla de ADN y proteínas con extracción por filtro giratorio
- Extracción de ADN de alto rendimiento en formato de 96 pocillos
- Lisis eficiente con protocolo de microesferas
- Extracción de proteínas celulares totales, más proteína microbiana del suelo.
- ADN y proteínas de alta calidad, listos para usar, para aplicaciones posteriores

Detalles del producto

Los kits microbianos DNeasy UltraClean/NoviPure permiten la extracción de ADN genómico de alta calidad de diversos microorganismos, como levaduras, bacterias y hongos. También permiten la extracción de proteína celular total de hongos, bacterias grampositivas y gramnegativas, y otros cultivos microbianos. Se puede aislar proteína microbiana extracelular e intracelular de hasta 5 g de cualquier tipo de suelo, sin necesidad de coextracción de compuestos que interfieran, como las sustancias húmicas.

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El aislamiento de ADN mediante el kit microbiano DNeasy UltraClean se puede automatizar en QIAcube Connect.

Actuación

El procedimiento DNeasy UltraClean Microbial extrae ADN de alta calidad de una variedad de microorganismos (consulte la figura “DNeasy UltraClean purifica ADN de alta calidad de una variedad de microorganismos”).

La purificación de proteínas mediante los procedimientos NoviPure permite la extracción de altos rendimientos de proteína pura (véanse las figuras «Altos rendimientos de proteína de todo tipo de suelo con el Kit de Proteína de Suelo NoviPure» y «Extracción de proteína pura del suelo con el Kit de Proteína de Suelo NoviPure»). La proteína purificada proporcionó resultados de alta calidad en aplicaciones posteriores exigentes (véase la figura «Mejores resultados de proteína con el Kit de Proteína de Suelo NoviPure»).

Procedimiento

El procedimiento DNeasy UltraClean Microbial utiliza un protocolo de agitación de microesferas para extraer ADN. Las células microbianas se resuspenden en una solución de microesferas y se añaden a un tubo o placa de agitación de microesferas. A continuación, se añade la solución de lisis. Los microorganismos se lisan mediante una combinación de calor, detergente y fuerza mecánica debido a la fuerza de impacto y el efecto de cizallamiento de las microesferas especializadas. Los componentes celulares se lisan mecánicamente utilizando un adaptador Vortex especialmente diseñado en un agitador Vortex estándar o un agitador de placas de 96 pocillos. El ADN liberado de las células lisadas se une a un filtro de centrifugación de sílice o a una placa de centrifugación. El filtro de centrifugación se lava y el ADN se recupera en tampón Tris sin ADN.

La purificación de ADN de hasta 12 muestras se puede automatizar en QIAcube Connect.

El procedimiento NoviPure utiliza un protocolo de microesferas en presencia de un potente agente caotrópico para lisar y solubilizar eficazmente las proteínas totales de una gran variedad de especies microbianas, incluyendo hongos y bacterias gramnegativas y grampositivas. El uso de filtros de centrifugación de sílice (en las columnas de centrifugación MB) para lograr la inmovilización reversible de las proteínas —un avance técnico con patente en trámite en la química de la extracción de proteínas— simplifica enormemente el aislamiento de proteínas al eliminar los tediosos y sesgados pasos de precipitación de proteínas. Tras la digestión con tripsina en gel, las proteínas aisladas son aptas para aplicaciones posteriores como SDS-PAGE 1D y espectrometría de masas.

La proteína microbiana desnaturalizada se puede extraer de una amplia gama de tipos de suelo mediante un protocolo de agitación con dos tampones para lisar eficazmente las células y solubilizar las proteínas intracelulares y extracelulares. La proteína se precipita y el pellet se lava para eliminar las sales y el detergente residuales. El pellet de proteína se puede resuspender en cualquier tampón para su posterior análisis o almacenamiento.

Aplicaciones

Los ácidos nucleicos aislados (ADNg, ARNr, ARNm y ARN pequeños) son adecuados para aplicaciones posteriores exigentes, incluidas PCR, qPCR, RT-PCR y secuenciación de próxima generación (NGS).

Las proteínas extraídas se pueden utilizar en una amplia gama de aplicaciones posteriores, incluida la espectrometría de masas y la electroforesis en gel de poliacrilamida 1D o 2D.