Qiagen, 12663, Kit Maxi de Plásmidos de Alta Velocidad (25)

25 puntas HiSpeed ​​Maxi, 25 cartuchos QIAfilter Maxi, 25 módulos QIAprecipitator Maxi más jeringas, reactivos y tampones

Características

- Menos de 60 minutos de tiempo de preparación
- Aclaramiento del lisado y precipitación con isopropanol sin centrifugación
- No hay riesgo de pérdida de pellets de ADN durante la precipitación
- Rendimiento de hasta 750 µg de ADN plasmídico de alto número de copias
- LyseBlue para una lisis óptima y un rendimiento máximo de ADN
- Preparación de plásmidos a gran escala sin colector de vacío

Detalles del producto

Los kits de plásmidos HiSpeed ​​permiten la preparación rápida y a gran escala de ADN plasmídico mediante intercambio aniónico sin centrifugación. El ADN purificado es equivalente al obtenido mediante centrifugación en gradiente de CsCl 2x y es apto para aplicaciones de transfección.

Actuación

Los kits de plásmidos HiSpeed ​​contienen cartuchos QIAfilter, puntas HiSpeed ​​y módulos QIAprecipitator para la preparación rápida de plásmidos a gran escala sin necesidad de un colector de vacío. Los módulos QIAfilter y QIAprecipitator con formato de jeringa sustituyen la centrifugación en el procedimiento clásico de intercambio aniónico, lo que agiliza y simplifica la purificación de plásmidos. Se pueden purificar hasta 750 µg (máximo) o 200 µg (mínimo) de ADN plasmídico de alto número de copias a partir de cultivos de 150 ml a 250 ml o de 50 ml a 150 ml, respectivamente (los volúmenes de cultivo dependen del número de copias del plásmido, el tamaño del inserto, la cepa huésped y el medio de cultivo). El diseño de las puntas HiSpeed ​​permite un caudal muy alto, lo que permite que la unión del ADN, el lavado y la elución del ADN aceleren la purificación de plásmidos.

La exclusiva resina de intercambio aniónico de las puntas HiSpeed ​​está desarrollada exclusivamente para la purificación de ácidos nucleicos. Sus excepcionales propiedades de separación permiten una pureza del ADN equivalente o superior a la obtenida mediante dos rondas sucesivas de centrifugación en gradiente de CsCl.

Principio

Características: Kit HiSpeed ​​Plasmid Midi
Aplicaciones: Transfección, clonación, secuenciación, silenciamiento de genes.
Volumen de cultivo/material de partida: 50 µl – 150 ml de volumen de cultivo
Tipo de plásmido: ADN cósmido de alto número de copias
Procesamiento: Manual (filtración)
Muestra por ejecución: 1 muestra por ejecución
Tecnología: Tecnología de intercambio aniónico
Tiempo por carrera: 45 min
Rendimiento: <200 µg

Los cartuchos QIAfilter (véase la figura "Cartucho QIAfilter") son unidades de filtración especiales diseñadas para sustituir el paso de centrifugación tras la lisis alcalina de células bacterianas. Los cartuchos QIAfilter eliminan completamente los precipitados de SDS y aclaran los lisados ​​bacterianos en una fracción del tiempo necesario para la centrifugación. Las puntas HiSpeed ​​preempacadas funcionan por gravedad y nunca se secan, lo que minimiza el tiempo de preparación manual de plásmidos.

El exclusivo módulo QIAprecipitator (véase la figura "Módulo QIAprecipitator") sustituye el paso de centrifugación utilizado tradicionalmente para recolectar ADN precipitado con isopropanol tras la purificación. El módulo QIAprecipitator atrapa el ADN precipitado, mientras la mezcla de isopropanol y tampón fluye a través de él. A continuación, el ADN se eluye del QIAprecipitator a un tubo de microcentrífuga con tampón TE o agua. Este módulo único también elimina el riesgo de pérdida de pellets, que puede producirse durante la decantación del sobrenadante tras la centrifugación.

Procedimiento

Los lisados ​​bacterianos neutralizados se incuban en el cartucho QIAfilter y se clarifican en segundos mediante filtración. El filtrado se aplica a una punta HiSpeed ​​para la purificación del ADN plasmídico (véase el diagrama de flujo "Procedimientos del kit de plásmidos QIAGEN"). El ADN eluido se mezcla con isopropanol y se aplica al módulo QIAprecipitator con la jeringa proporcionada. A continuación, el ADN concentrado y desalinizado se eluye del QIAprecipitator directamente a un tubo de microcentrífuga con tampón TE o agua.

Aplicaciones

El ADN purificado con los kits de plásmidos HiSpeed ​​produce excelentes resultados en todas las aplicaciones, desde la clonación y secuenciación hasta la transfección y el silenciamiento de genes mediado por plásmidos.