Qiagen, 150052, Kit de WGA y WTA de células REPLI-g (12)

REPLI-g SensiPhi ADN polimerasa, tampones y reactivos para reacciones de amplificación de genoma completo en paralelo de 12 x 60 µl y reacciones de amplificación de transcriptoma completo de 12 x 60 µl (rendimiento típico: 20 µg de cada reacción)

Características

- Amplificación paralela de ADN genómico y ARN (total o enriquecido con ARNm)
- Correlacionar fácilmente el estado genómico con el patrón de transcripción
- Sesgo de secuencia insignificante debido a la tecnología MDA
- Amplificar gDNA y ARN directamente de células o tejido
- Para usar con todas las aplicaciones posteriores, incluido NGS

Actuación

Material de muestra (células/ARN total): Área de investigación
Cáncer: análisis de variantes genéticas somáticas
progresión del tumor
Células madre tumorales/evolución
Heterogeneidad tumoral
Análisis de variantes genéticas somáticas
Humano/animal: Investigación de biomarcadores (SNP, mutaciones, CNV)
Estudios de mosaicismo
Investigación con células madre
Estudios de predisposición genética

Cobertura genómica y transcriptómica completa, con baja variabilidad experimental

Ideal para analizar los perfiles genómicos y transcriptómicos de muestras limitadas.

Para uso en una amplia variedad de áreas de investigación.

Principio

Todas las enzimas y componentes de amplificación del kit se someten a un procedimiento de descontaminación único y controlado para garantizar la eliminación del ADN o ARN contaminante amplificable por REPLI-g. Tras este procedimiento, los kits se someten a un riguroso control de calidad para garantizar su completa funcionalidad.
El exclusivo tampón de lisis estabiliza eficazmente el ARN y el ADN celular. Esto garantiza que el ARN resultante refleje con precisión el perfil de expresión génica in vivo y que el ARN y el ADN se mantengan intactos, maximizando la cobertura genómica para análisis posteriores.
Todos los pasos enzimáticos se han desarrollado específicamente para permitir el procesamiento eficiente del ARN o ADN y lograr una amplificación precisa. Por ejemplo, estos procesos incluyen la eliminación eficaz del ADNg antes de la síntesis del ADNc para la amplificación del ARN y la preparación enzimática del ADN, que garantiza una amplificación eficiente del ADN.
La novedosa ADN polimerasa REPLI-g SensiPhi se utiliza para la amplificación por desplazamiento múltiple (ADM). Se trata de una enzima de alta afinidad recientemente desarrollada que se une al ADN con mayor eficiencia, especialmente cuando la concentración de ADN en la mezcla de reacción es baja. Además, a diferencia de los métodos basados ​​en PCR, la ADN polimerasa REPLI-g SensiPhi posee una potente actividad de corrección de errores que resulta en una reducción de errores 1000 veces mayor. También posee una potente actividad de desplazamiento de cadena, lo que permite la replicación del ADN mediante estructuras de horquilla estables, resistentes a los procedimientos de amplificación de genoma completo y transcriptoma completo basados ​​en Taq.

Componentes únicos del kit REPLI-g Cell WGA & WTA

Procedimiento

Lisis celular: una muestra (de 25 a 1000 células) se lisa eficazmente en 5 minutos, sin afectar la integridad del ARN ni del ADN. Las células lisadas se dividen en dos alícuotas de igual volumen. La primera alícuota se utiliza para la AGT, mientras que la segunda alícuota se utiliza para la ATP del ARN total o, alternativamente, del ARN enriquecido con ARNm (poli A+).
Amplificación del genoma completo: tras la lisis celular, se modifica el ADN de una de las alícuotas para una ligación de alta eficiencia. Debido a la naturaleza de la reacción de ligación, los fragmentos de ADN no se ensamblan en el orden en que habrían existido originalmente en el organismo. Sin embargo, esto no afecta la detección de secuencias de ácidos nucleicos (p. ej., polimorfismos) en aplicaciones posteriores, como NGS, análisis de matrices o qPCR. Tras la ligación, se lleva a cabo la amplificación mediante tecnología MDA y la novedosa ADN polimerasa REPLI-g SensiPhi de alta afinidad.
Amplificación del transcriptoma completo: tras la lisis celular, se extrae el ADNg de la segunda alícuota antes de iniciar el proceso de WTA, ya que la medición precisa de los niveles de transcripción depende de la eliminación de falsos positivos causados ​​por la contaminación del ADNg. El ADNc se prepara para una ligadura y amplificación de alta eficiencia. Según el cebador seleccionado durante la reacción de transcripción inversa posterior, se amplificarán todas las transcripciones para el enriquecimiento total de ARN o solo las transcripciones poliadeniladas para el enriquecimiento de ARNm poli A+.

Aplicaciones

- ARNm con cola poli A+
- ARN total
- Todas las regiones de las transcripciones de ARN
- Extremos 3' de los ARNm
- ARN lnc y linc

- ADN genómico
- ADN mitocondrial

- ARNt y miARN
- ADN o ARN fuertemente degradado

El kit REPLI-g Cell WGA & WTA permite la amplificación paralela uniforme de todas las transcripciones y regiones genómicas a partir de una muestra muy pequeña. El ADNg y el ADNc amplificados en paralelo por el kit son muy adecuados para la secuenciación de próxima generación (tanto ADN-Seq como ARN-Seq*), el análisis mediante matrices, las aplicaciones de genotipificación o la PCR cuantitativa.

El kit REPLI-g Cell WGA y WTA es adecuado para la amplificación de:

Transcriptoma (ARN):

Genoma (ADN):

No es adecuado para su uso con ácidos nucleicos pequeños (por ejemplo):