Qiagen, 180613, Kit de normalizador universal QIAseq (24)

Contiene 24 reacciones de reactivos para la normalización de bibliotecas NGS que contienen secuencias P5/P7 intactas.

Características

- Produce bibliotecas normalizadas y listas para secuenciar a 4 nmol/L
- Protocolo de laboratorio simplificado de 30 minutos
- Integración perfecta en muchos flujos de trabajo de NGS, incluido QIAseq, así como prácticamente todos los flujos de trabajo de preparación de bibliotecas de terceros para Illumina
- Produce dsDNA para un almacenamiento de biblioteca estable y a largo plazo
- No se requiere campana extractora

Detalles del producto

Los kits de normalización QIAseq ofrecen un flujo de trabajo rápido y sencillo para ajustar diversos tipos de bibliotecas a una concentración fija (4 nmol/L). Una vez normalizadas, las bibliotecas pueden agruparse en volúmenes iguales para lograr una representación homogénea de las lecturas sin necesidad de cuantificarlas antes de la secuenciación. Los kits de normalización QIAseq permiten flujos de trabajo de NGS optimizados, rentables y con un tiempo de procesamiento más corto en comparación con los métodos convencionales que utilizan técnicas clásicas de cuantificación y agrupación de bibliotecas.

Los flujos de trabajo de QIAseq Normalizer son compatibles con prácticamente todas las bibliotecas secuenciables en los instrumentos de secuenciación de Illumina. Esto incluye flujos de trabajo de preparación de bibliotecas de QIAGEN y de terceros para los instrumentos de secuenciación de Illumina.

¿Quieres probar el kit de normalización de bibliotecas QIAseq por primera vez? Solicita un presupuesto para un kit de prueba.

¿Quieres probar el Kit Normalizador Universal QIAseq por primera vez? Solicita un presupuesto para un kit de prueba.

Actuación

- Normalización confiable en un amplio rango de concentraciones de biblioteca desde 15 nmol/L hasta más de 300 nmol/L
- Requisitos de baja concentración de biblioteca: 15 nmol/L o más en un volumen de 15 µl
- Compatibilidad total con varios tipos de bibliotecas: genoma completo, transcriptoma completo, bibliotecas enriquecidas con objetivos
- Bibliotecas de dsDNA normalizadas y reproducibles a 4 nmol/L

- Reducir costos y maximizar la utilización de lectura mediante una representación homogénea de la biblioteca
- Agilice el proceso de secuenciación de la biblioteca reemplazando los métodos de cuantificación de biblioteca que consumen mucho tiempo con el flujo de trabajo QIAseq Normalizer
- Eliminar los tediosos métodos de PCR de sus flujos de trabajo
- Lograr la normalización de la biblioteca con precisión de nivel qPCR en un tiempo mínimo
- Almacenar bibliotecas de dsDNA normalizadas durante un período más largo

Los kits normalizadores QIAseq permiten al usuario:

Principio

Los kits QIAseq Normalizer utilizan cebadores de amplificación de bibliotecas modificados y una química basada en microesferas magnéticas para unir y liberar eficientemente una cantidad definida de moléculas de la biblioteca de forma estrictamente controlada. Con una concentración objetivo de aproximadamente 4 nmol/L, las bibliotecas normalizadas se ajustan rigurosamente para una agrupación equilibrada de las bibliotecas y una agrupación óptima en las celdas de flujo Illumina. Las moléculas de la biblioteca de dsADN se eluyen de las microesferas en condiciones no desnaturalizantes y pueden almacenarse de forma segura a -20 °C para un almacenamiento a largo plazo.

La secuenciación multiplexada rentable requiere la agrupación precisa de bibliotecas para lograr profundidades de secuenciación comparables para todas ellas. Si no se combinan bibliotecas en proporciones iguales, se producirá una subrepresentación o sobrerrepresentación de bibliotecas en términos de rendimiento de secuenciación. Las bibliotecas subrepresentadas resultarán en muy pocas lecturas de secuencias, y las bibliotecas sobrerrepresentadas desperdiciarán capacidad de secuenciación. El estándar de oro actual para permitir la agrupación de bibliotecas con precisiones aceptables es cuantificar cada biblioteca antes de la agrupación.

Los métodos típicos para la cuantificación de bibliotecas incluyen PCR (qPCR/dPCR), electroforesis capilar en gel y ensayos colorimétricos de ADN. Si bien la qPCR ha demostrado cuantificar bibliotecas con alta precisión, su realización es laboriosa, requiere mucho tiempo y es costosa. Además, la predilución de bibliotecas para qPCR y la dilución manual de bibliotecas según la concentración analizada aumentan la probabilidad de error.

Procedimiento

El flujo de trabajo del QIAseq Normalizer sigue una rutina simple de unión, lavado y elución, idéntica para todos los tipos de bibliotecas compatibles. Las bibliotecas normalizadas son dsADN y tienen una concentración común de aproximadamente 4 nmol/L, lo que permite su uso directo para la agrupación y la secuenciación.

Antes de la normalización, las bibliotecas deben modificarse con la mezcla de cebadores Normalizadores. Durante una PCR de 2 ciclos con la mezcla de cebadores Normalizadores, se pueden añadir modificaciones a prácticamente cualquier tipo de biblioteca de Illumina con extremos P5/P7 intactos. Los extremos P5/P7 están presentes en cualquier biblioteca terminada que pueda secuenciarse en los instrumentos de Illumina.

Los flujos de trabajo de preparación de bibliotecas que implican la ligadura de adaptadores indexados de longitud completa permiten la modificación de bibliotecas durante el proceso y no requieren un paso adicional de PCR. Los adaptadores de longitud completa, como los adaptadores Y QIAseq CDI/UDI, contienen secuencias P5/P7 de longitud completa. Por lo tanto, las bibliotecas pueden modificarse utilizando la mezcla de cebadores Normalizer durante el paso de amplificación de la biblioteca. El flujo de trabajo QIAseq Normalizer no es compatible con la preparación de bibliotecas sin PCR.

Aplicaciones

Las bibliotecas normalizadas con los kits normalizadores QIAseq están directamente listas para secuenciarse en un instrumento Illumina.

Los kits normalizadores QIAseq son compatibles con todos los kits de preparación de bibliotecas QIAseq y prácticamente todos los kits de preparación de bibliotecas de terceros, siempre que no estén destinados a la captura híbrida posterior.