Qiagen, 20021, Kit de extracción de gel QIAEX II (150)

Para 150 extracciones: 3 x 0,5 ml de suspensión QIAEX II, tampones

Características

- Extracción eficiente de ADN de 40 pb a 50 kb
- Extracción de geles de agarosa TAE o TBE y geles de poliacrilamida
- Sin yoduro de sodio que interfiera con reacciones posteriores.
- Sin cizallamiento de grandes fragmentos de ADN

Detalles del producto

El sistema QIAEX II proporciona una suspensión de partículas de sílice a las que se unen fragmentos de ADN en presencia de sales caotrópicas. La suspensión QIAEX II se añade a soluciones o cortes de gel de agarosa solubilizado y se une al ADN. Las partículas se recogen mediante una breve centrifugación, se lavan y el ADN de 40 pb a 50 kb se eluye en tampón Tris o agua.

Actuación

Tamaño del ADN: Recuperación, porcentaje*
44 pb: 75
75 pb: 75
500 pb: 95
7,5 kb: 85
23,5 kb: 75
48,5 kb: 60

Con el sistema QIAEX II, se recuperan eficientemente de 10 ng a 10 µg de ADN (véase la figura "Recuperación consistente"). Este versátil procedimiento para la purificación por lotes de fragmentos de gel puede ampliarse fácilmente hasta una capacidad de unión de 15 µg utilizando 30 µl de suspensión de QIAEX II.

El sistema QIAEX II proporciona partículas de sílice para purificar entre el 60 % y el 95 % de fragmentos de ADN (40 pb – 50 kb). Un volumen de 10 µl de suspensión de QIAEX II une hasta 5 µg de ADN, que posteriormente se eluyen en 20 µl.

Recuperación según tamaño

Principio

La purificación de fragmentos de ADN con el sistema QIAEX II se basa en la solubilización de agarosa y la adsorción selectiva de ácidos nucleicos sobre partículas de gel de sílice QIAEX II en presencia de una sal caotrópica. QIAEX II separa el ADN de sales, agarosa, poliacrilamida, colorantes, proteínas y nucleótidos sin extracción con fenol ni precipitación con etanol. QIAEX II es eficaz con cualquier tipo de agarosa en tampones TAE o TBE.

Las partículas QIAEX II proporcionan una suspensión para la extracción en gel y garantizan una recuperación eficiente sin cizallamiento, incluso para fragmentos grandes de ADN. Los tampones optimizados permiten la recuperación de ADN sin yoduro de sodio, que es difícil de eliminar de las muestras de ADN y puede afectar las reacciones posteriores.

El tampón de solubilización y unión utilizado con el sistema QIAEX II contiene un indicador de pH único. Un simple cambio de color indica si el pH de la mezcla de unión es óptimo para una adsorción eficiente del ADN a las partículas de sílice de QIAEX II (véase la figura "Colorante indicador de pH"). El colorante también permite visualizar fácilmente la agarosa no solubilizada en la mezcla de unión, lo que garantiza una solubilización completa para obtener el máximo rendimiento.

El colorante indicador de pH en el tampón de solubilización y unión permite determinar visualmente el pH óptimo para la adsorción de ADN (pH ≤7,5). Si el tampón de electroforesis en gel de agarosa se utilizó con frecuencia o se preparó incorrectamente, puede producirse un pH incorrecto en la mezcla de unión. En este caso, el pH se puede ajustar fácilmente añadiendo 10 µl de acetato de sodio 3 M, pH 5,0.

Procedimiento

Se añaden partículas de gel de sílice QIAEX II al corte de gel solubilizado y se recogen mediante una breve centrifugación (véase el diagrama de flujo "Procedimiento QIAEX II"). Tras el lavado, el fragmento de ADN puro se eluye en 20 µl de tampón Tris o agua.

El sistema QIAEX II proporciona una suspensión QIAEX II junto con tampones de unión y lavado, y un manual completo. Incluye protocolos para la purificación de ADN en geles de agarosa, soluciones y geles de poliacrilamida.

Aplicaciones

- Digestión con restricción
- Etiquetado
- Ligadura
- PCR

El ADN purificado con el sistema QIAEX II se puede utilizar directamente en la mayoría de las aplicaciones, incluidas: