Qiagen, 203123, Kit básico de PCR AllTaq (250 U) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

50 µl de polimerasa AllTaq (5 U/µl), 1,2 ml de tampón de PCR AllTaq (5x), 55 µl de mezcla de dNTP (10 mM cada una), 200 µl de trazador de plantilla (25x), 50 µl de trazador de mezcla maestra (125x), 2 ml de solución Q (5x), 1,2 ml de MgCl2 (25 mM), 1,9 ml de agua sin ARNasa
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Características

- Control de pipeteo visual simple y colorantes de seguimiento de gel que monitorean el éxito del procedimiento
- El mismo protocolo de 45 minutos para todos los objetivos, incluidos los ricos en GC y los objetivos largos de hasta 9 kb
- La química versátil permite la PCR dúplex y la inclusión de controles internos
- Mezcla maestra concentrada 4x y excelente estabilidad a temperatura ambiente
- La química de inicio en caliente y protegida proporciona especificidad y sensibilidad superiores

Detalles del producto

El kit AllTaq Master Mix y el kit AllTaq PCR Core ofrecen un formato práctico para PCR de inicio en caliente de alta sensibilidad y especificidad utilizando cualquier plantilla de ADN o ADNc. Ambos kits son ideales para todas las aplicaciones de PCR y ofrecen las siguientes características: controles visuales de pipeteo, carga de gel y seguimiento de colorantes, un protocolo de ciclado ultrarrápido, estabilidad extrema a temperatura ambiente durante y después de la configuración de la reacción, y un formato de mezcla maestra con una concentración 4x, lo que permite un mayor volumen de muestra.

¿Quieres probar la solución AllTaq Master Mix Kit por primera vez? Solicita un presupuesto para un kit de prueba.

¿Quieres probar la solución AllTaq PCR Core Kit por primera vez? Solicita un presupuesto para un kit de prueba.

Actuación

La innovadora formulación de AllTaq Master Mix y AllTaq PCR Buffer facilita la amplificación de productos específicos de PCR y ofrece resultados satisfactorios al primer intento, utilizando el mismo protocolo para todos los objetivos. Durante el paso de annealing, el buffer permite una alta proporción de unión de cebadores específicos a no específicos (véase la figura PCR buffer ). La composición verificada del buffer está adaptada a condiciones de ciclado ultrarrápido y, al mismo tiempo, proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un amplio rango de temperaturas de annealing. AllTaq PCR Buffer también garantiza capacidades dúplex perfectas. No se requiere la optimización de PCR variando la temperatura de annealing (véase la figura No annealing temperature optimization) ni la concentración de Mg 2+. La versátil química permite la amplificación de objetivos largos de hasta 9 kb, así como la PCR dúplex, lo que proporciona una planificación flexible del flujo de trabajo utilizando el mismo kit de PCR. La Q-solution proporcionada en AllTaq PCR Core Kit facilita la amplificación de estructuras secundarias difíciles, como las plantillas ricas en GC. El mecanismo de inicio en caliente protegido por protección (ver figura Principio del mecanismo de inicio en caliente de AllTaq) evita fugas prematuras de PCR, lo que garantiza una especificidad y sensibilidad superiores hasta una única molécula objetivo (ver figura Detección de copia única).

Principio

El AllTaq Master Mix Kit proporciona una formulación de mezcla maestra práctica y lista para usar. El AllTaq PCR Core Kit ofrece AllTaq DNA Polymerase, AllTaq PCR buffer, dNTPs, MgCl2 y Q-solution en tubos separados, en caso de que se desee optimizar el protocolo de PCR (ver figura Amplificación de fragmentos largos de PCR). Ambos kits proporcionan Master Mix Tracer naranja y Template Tracer azul en viales separados para uso opcional. A bajas temperaturas, AllTaq DNA Polymerase se mantiene en un estado inactivo por un anticuerpo y una nueva molécula de guarda, que estabilizan el complejo (ver figura Principio del mecanismo de inicio en caliente de AllTaq). Esto mejora la rigurosidad del inicio en caliente y evita cualquier actividad enzimática a temperatura ambiente, lo que permite la configuración de la reacción sin hielo, facilitando la automatización. La enzima se activa completamente después del paso de incubación de 2 minutos a 95 °C y comienza a amplificar con alta especificidad desde el primer ciclo. El procedimiento de arranque en caliente elimina la extensión de los cebadores y dímeros de cebadores annealed inespecíficamente desde el primer ciclo, asegurando una PCR altamente específica y reproducible. La innovadora AllTaq PCR Master Mix y el AllTaq Buffer facilitan condiciones de ciclado ultrarrápido y simultáneamente proporcionan condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un amplio rango de temperaturas de annealing. También aseguran capacidades dúplex perfectas. No se requiere la optimización de la PCR variando la temperatura de annealing o la concentración de Mg₂. Los colorantes azul y naranja en el trazador de la plantilla de PCR y en el trazador de la mezcla maestra de PCR, respectivamente, permiten el seguimiento visual de las muestras pipeteadas durante la configuración de la PCR, previniendo errores. Cuando se agrega la plantilla azul a la mezcla maestra de PCR naranja, el color cambia a verde, confirmando que se agregó la muestra (ver figura Control visual de pipeteo). El uso de estos trazadores es opcional. Las reacciones se pueden cargar directamente en geles de agarosa después del ciclado. Cada colorante trazador permite la monitorización del proceso de carga y el seguimiento eficiente de la electroforesis posterior (ver figura Colorantes de seguimiento integrados).

Procedimiento

El AllTaq Master Mix Kit proporciona una fórmula práctica y lista para usar, con una concentración 4x, que permite un alto volumen de plantilla para aumentar aún más la sensibilidad. El AllTaq PCR Core Kit ofrece AllTaq DNA Polymerase, tampón de PCR, dNTP, MgCl₂ y solución Q en tubos separados, si se desea optimizar el protocolo de PCR. El trazador naranja de la mezcla maestra se puede añadir opcionalmente a la mezcla maestra o al tampón de PCR. Cuando se añade la plantilla teñida con el trazador azul de la plantilla a la mezcla maestra, el color de la solución cambia de naranja a verde, lo que proporciona una indicación visual del pipeteo y la configuración de la reacción correctos (véase la figura Procedimiento de PCR). Los colorantes trazadores permiten la carga directa en geles de agarosa después de la PCR y el seguimiento eficiente de la electroforesis posterior. Los colorantes se ejecutan a aproximadamente 50 pb (naranja) y 4000 pb (azul) en un gel de agarosa al 1% (véase la figura Colorantes de seguimiento integrados). El versátil sistema de tampón permite una PCR ultrarrápida, en aproximadamente 45 minutos, utilizando el mismo protocolo para cualquier PCR estándar y PCR dúplex. Se proporciona un protocolo de ciclado para moldes largos, de entre 1 y 9 kb. El mecanismo de arranque en caliente con protección permite la configuración completa de la reacción a temperatura ambiente, eliminando la necesidad de hielo y permitiendo el pipeteo automático. Tras la configuración de la reacción, las muestras pueden permanecer a temperatura ambiente durante más de 3 días antes del ciclado de la PCR. Además, la mezcla maestra es extremadamente estable, evitando su degradación durante el uso y permitiendo su almacenamiento a 2-8 °C hasta por 6 meses. El kit AllTaq PCR Core contiene Q-Solution, que se puede añadir opcionalmente. Q-Solution facilita la amplificación de dianas difíciles al modificar el comportamiento de fusión de los ácidos nucleicos (p. ej., moldes con un alto grado de estructura secundaria o ricos en GC). Para optimizar aún más los flujos de trabajo de PCR, recomendamos el instrumento QIAgility para la configuración automatizada de la reacción y el análisis de PCR en el sistema QIAxcel Advanced.