Qiagen, 203209, ADN polimerasa HotStarTaq (25000)

100 x 250 unidades de ADN polimerasa HotStarTaq, 100 x 1,2 ml de juego de tampones HotStarTaq, 100 x 2,0 ml de solución Q, 100 x 1,2 ml de MgCl2

Características

- Requisitos mínimos de optimización
- Alta especificidad de PCR
- Fácil manejo y configuración a temperatura ambiente.

Actuación

ADN polimerasa HotStarTaq: enzima de arranque en caliente del proveedor A II
Amplificación específica: ++
Optimización mínima de PCR: ++
Fácil de usar: ++

Cada lote de ADN polimerasa HotStarTaq se somete a un exhaustivo control de calidad, que incluye un riguroso ensayo de especificidad y reproducibilidad de PCR en el que se amplifican dianas con un bajo número de copias. La ADN polimerasa HotStarTaq superó a los kits de otros proveedores y garantiza una alta especificidad y un rendimiento superior en la PCR de inicio en caliente (véanse las figuras «Mayor especificidad con diferentes sistemas de cebador-molde» y «Rendimiento superior» y la tabla). El innovador tampón de PCR incluido en el kit garantiza la especificidad en una amplia gama de condiciones de PCR, minimizando la necesidad de optimización (véase la figura «Tolerancia a temperaturas y concentraciones de magnesio variables»). La PCR subóptima se puede mejorar con Q-Solution, también incluida en el kit (véase la figura «Amplificación de moldes difíciles»). Juntos, estos componentes garantizan una amplificación específica en diversas aplicaciones (véanse las figuras «Efecto del inicio en caliente en el rendimiento de la RT-PCR» y «PCR de célula única de alta sensibilidad»).

Especificaciones de la ADN polimerasa HotStarTaq

Concentración: 5 unidades/µl Enzima recombinante: Sí Análogos del sustrato: dNTP, ddNTP, dUTP, biotina-11-dUTP, DIG-11-dUTP, dNTP/ddNTP fluorescente Tasa de extensión: 2–4 kb/min a 72 °C Vida media: 10 min a 97 °C; 60 min a 94 °C Eficiencia de amplificación: ≥10 5 veces Actividad de exonucleasa 5'–>3': Sí Adición de A extra: Sí Actividad de exonucleasa 3'–>5': No Nucleasas contaminantes: No ARNasas contaminantes: No Proteasas contaminantes: No Actividad de autocebado: No

Principio

La ADN polimerasa HotStarTaq, una forma modificada de la ADN polimerasa Taq, proporciona alta especificidad en la PCR de inicio en caliente. El kit incluye un innovador tampón de PCR de doble catión, Q-Solution y MgCl₂.

ADN polimerasa HotStarTaq

La ADN polimerasa HotStarTaq se suministra inactiva y no presenta actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto evita la extensión de los cebadores annealed inespecíficamente y los dímeros de cebadores formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR y el ciclo inicial (véanse las figuras «Rendimiento superior en PCR de inicio en caliente» y «Mayor especificidad con diferentes sistemas cebador-molde»). La ADN polimerasa HotStarTaq se activa mediante una incubación de 15 minutos a 95 °C, que puede incorporarse a cualquier programa de termociclador.

Tampón de PCR QIAGEN

El tampón de PCR QIAGEN mantiene la amplificación específica en cada ciclo de PCR al promover una alta proporción de unión de cebadores específicos e inespecíficos durante el paso de annealing en cada ciclo de PCR (véase la figura "Mayor especificidad del annealing de cebadores"). Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄)₂SO₄, este tampón proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de annealing y concentraciones de Mg₂+ que los tampones de PCR convencionales. Por lo tanto, la optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de annealing o la concentración de Mg₂+ suele ser mínima o innecesaria (véase la figura "Tolerancia a temperaturas y concentraciones de magnesio variables").

Solución Q

Q-Solution, un innovador aditivo para PCR que facilita la amplificación de moldes complejos modificando el comportamiento de fusión del ADN, también se incluye con la ADN polimerasa HotStarTaq. Este reactivo único mejora la PCR subóptima causada por moldes con un alto grado de estructura secundaria o con moldes ricos en GC (véase la figura "Amplificación de moldes complejos"). A diferencia de otros aditivos de PCR de uso común, como el DMSO, Q-Solution se utiliza en una única concentración de trabajo, no es tóxico y la pureza de la PCR está garantizada. Añadir Q-Solution a la PCR no compromete la fidelidad de la misma.

Aplicaciones

- Plantillas genómicas complejas
- Plantillas de ADNc complejas (por ejemplo, RT-PCR)
- Objetivos con muy pocas copias (por ejemplo, PCR de una sola célula)
- Reacciones con múltiples pares de cebadores

La ADN polimerasa HotStarTaq es adecuada para una amplia variedad de aplicaciones, incluidas aplicaciones desafiantes, como la amplificación de: