Qiagen, 203445, Kit de mezcla maestra HotStarTaq (1000 U)

12 x 0,85 ml de mezcla maestra HotStarTaq (contiene 1000 unidades de ADN polimerasa HotStarTaq, tampón de PCR con 3 mM de MgCl2 y 400 µM de cada dNTP) y 8 x 1,7 ml de agua sin ARNasa

Características

- Alta especificidad de PCR sin necesidad de optimización
- Fácil configuración de la reacción a temperatura ambiente.
- El formato de mezcla maestra lista para usar reduce los pasos de pipeteo

Actuación

ADN polimerasa HotStarTaq: enzima de arranque en caliente del proveedor A II
Amplificación específica: ++
Optimización mínima de PCR: ++
Fácil de usar: ++

Cada lote del Kit HotStarTaq Master Mix se somete a un exhaustivo control de calidad, que incluye un riguroso ensayo de especificidad y reproducibilidad de PCR, en el que se amplifican dianas con un bajo número de copias. El Kit HotStarTaq Master Mix superó a los kits probados de otros proveedores y garantiza una alta especificidad y un rendimiento superior en PCR de inicio en caliente (véanse las figuras «Mayor especificidad con diferentes sistemas de cebador-molde» y «Rendimiento superior» y la tabla). El innovador tampón de PCR incluido en el kit garantiza la especificidad en una amplia gama de condiciones de PCR, minimizando la necesidad de optimización (véase la figura «Tolerancia a temperaturas y concentraciones de magnesio variables»).

La combinación de alta especificidad y fácil manejo hace que el HotStarTaq Master Mix Kit sea adecuado para su uso con plantillas genómicas o de ADNc complejas (véase la figura "Efecto del inicio en caliente en el rendimiento de la RT-PCR"), múltiples pares de cebadores (véase la figura "Amplificación específica en PCR multiplex") y plantillas aisladas de fuentes difíciles o dianas con un número muy bajo de copias (véase la figura "PCR unicelular de alta sensibilidad"). También es adecuado para proyectos como el cribado genético, en los que se amplifican grandes cantidades de muestras.

Especificaciones de la ADN polimerasa HotStarTaq

Concentración: 5 unidades/µl Enzima recombinante: Sí Análogos del sustrato: dNTP, ddNTP, dUTP, biotina-11-dUTP, DIG-11-dUTP, dNTP/ddNTP fluorescente Tasa de extensión: 2–4 kb/min a 72 °C Vida media: 10 min a 97 °C; 60 min a 94 °C Eficiencia de amplificación: ≥10 5 veces Actividad de exonucleasa 5'–>3': Sí Adición de A extra: Sí Actividad de exonucleasa 3'–>5': No Nucleasas contaminantes: No ARNasas contaminantes: No Proteasas contaminantes: No Actividad de autocebado: No >

Principio

La mezcla maestra HotStarTaq es una mezcla lista para usar de ADN polimerasa HotStarTaq, tampón de PCR QIAGEN y dNTP. La ADN polimerasa HotStarTaq, una forma modificada de la ADN polimerasa Taq, proporciona alta especificidad en la PCR de inicio en caliente.

ADN polimerasa HotStarTaq

La ADN polimerasa HotStarTaq se suministra inactiva y no presenta actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto evita la extensión de los cebadores annealed inespecíficamente y los dímeros de cebadores formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR y el ciclo inicial (véanse las figuras «Rendimiento superior en PCR de inicio en caliente» y «Mayor especificidad con diferentes sistemas cebador-molde»). La ADN polimerasa HotStarTaq se activa mediante una incubación de 15 minutos a 95 °C, que puede incorporarse a cualquier programa de termociclador.

Tampón de PCR QIAGEN

El tampón de PCR QIAGEN mantiene la amplificación específica en cada ciclo de PCR al promover una alta proporción de unión de cebadores específicos e inespecíficos durante el paso de annealing en cada ciclo de PCR (véase la figura "Mayor especificidad del annealing de cebadores"). Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄)₂SO₄, este tampón proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de annealing y concentraciones de Mg₂+ que los tampones de PCR convencionales. La optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de annealing o la concentración de Mg₂+ suele ser mínima o no es necesaria (véase la figura "Tolerancia a temperaturas y concentraciones de magnesio variables").

Aplicaciones

- Plantillas genómicas complejas
- Plantillas de ADNc complejas (por ejemplo, RT-PCR)
- Objetivos con muy pocas copias (por ejemplo, PCR de una sola célula)
- Reacciones con múltiples pares de cebadores

El kit de mezcla maestra HotStarTaq es muy adecuado para una amplia variedad de aplicaciones, incluidas aplicaciones desafiantes como la amplificación de: