Qiagen, 203605, ADN polimerasa HotStarTaq Plus (1000)

1000 unidades de ADN polimerasa HotStarTaq Plus, tampón de PCR 10x, tampón de PCR CoralLoad 10x, solución Q 5x, 25 mM MgCl2

Características

- Alta especificidad de PCR con optimización mínima
- Tiempo de activación enzimática rápido de 5 minutos
- Tampón de PCR listo para cargar para un manejo más rápido y sencillo

Actuación

ADN polimerasa HotStarTaq Plus: ADN polimerasa HotStarTaq
Amplificación específica: ++
Optimización mínima de PCR: ++
Fácil de usar: +++
Velocidad de activación: ++

Cada lote de ADN polimerasa HotStarTaq Plus se somete a un exhaustivo control de calidad, que incluye un riguroso ensayo de especificidad y reproducibilidad de PCR en el que se amplifican dianas con un bajo número de copias. La ADN polimerasa HotStarTaq Plus superó a los kits probados de otros proveedores y garantiza una alta especificidad y un rendimiento superior en la PCR de inicio en caliente (véanse las figuras «Máxima especificidad» y «Mayor especificidad con diferentes sistemas de cebador-molde» y la tabla). El innovador tampón de PCR incluido en el kit garantiza la especificidad en una amplia gama de condiciones de PCR, minimizando la necesidad de optimización. La PCR subóptima se puede mejorar con Q-Solution, también incluida en el kit (véase la figura «Amplificación de moldes difíciles»). Juntos, estos componentes garantizan una amplificación específica en diversas aplicaciones (véanse las figuras «Efecto del inicio en caliente en el rendimiento de la RT-PCR» y «PCR de célula única de alta sensibilidad»).

Especificaciones de la ADN polimerasa HotStarTaq Plus

Concentración: 5 unidades/µl Enzima recombinante: Sí Análogos del sustrato: dNTP, ddNTP, dUTP, biotina-11-dUTP, DIG-11-dUTP, dNTP/ddNTP fluorescente Tasa de extensión: 2–4 kb/min a 72 °C Vida media: 10 min a 97 °C; 60 min a 94 °C Eficiencia de amplificación: ≥10 5 veces Actividad de exonucleasa 5'–>3': Sí Adición de A extra: Sí Actividad de exonucleasa 3'–>5': No Nucleasas contaminantes: No ARNasas contaminantes: No Proteasas contaminantes: No Actividad de autocebado: No

Principio

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus ofrece el rendimiento inigualable de la ADN polimerasa HotStarTaq con un tiempo de activación reducido de solo 5 minutos.

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus, una forma modificada de la ADN polimerasa Taq de QIAGEN, se suministra en estado inactivo, sin actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto evita la extensión de los cebadores annealed inespecíficamente y los dímeros de cebadores formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR y el ciclo inicial (véanse las figuras «Máxima especificidad» y «Mayor especificidad con diferentes sistemas cebador-molde»). La ADN polimerasa HotStarTaq Plus se activa mediante una breve incubación de 5 minutos a 95 °C, que puede incorporarse fácilmente a cualquier programa de termociclador.

Tampón de PCR QIAGEN

El tampón de PCR QIAGEN mantiene la amplificación específica en cada ciclo de PCR al promover una alta proporción de unión de cebadores específicos e inespecíficos durante el paso de annealing en cada ciclo de PCR (véase la figura "Mayor especificidad del annealing de cebadores"). Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄)₂SO₄, este tampón proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de annealing y concentraciones de Mg₂+ que los tampones de PCR convencionales. Por lo tanto, la optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de annealing o la concentración de Mg₂+ suele ser mínima o inexistente.

Tampón de PCR CoralLoad

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus se suministra con el tampón de PCR CoralLoad, que ofrece todas las ventajas del tampón de PCR de QIAGEN, pero también permite cargar directamente la reacción de PCR en un gel de agarosa sin necesidad de añadir un tampón de carga de gel. El tampón de PCR CoralLoad proporciona la misma alta especificidad de PCR y una optimización mínima de la reacción que el tampón de PCR convencional de QIAGEN. Además, contiene dos colorantes marcadores (uno naranja y otro rojo) que facilitan la estimación de la distancia de migración del ADN y la optimización del tiempo de ejecución en el gel de agarosa (véase la figura "Tampón de PCR CoralLoad"). El tampón garantiza una mejor visibilidad del pipeteo y permite la carga directa de los productos de PCR en un gel, para mayor comodidad.

Solución Q

Q-Solution, un innovador aditivo para PCR que facilita la amplificación de moldes complejos modificando el comportamiento de fusión del ADN, también se incluye con la ADN polimerasa HotStarTaq. Este reactivo único mejora la PCR subóptima causada por moldes con un alto grado de estructura secundaria o ricos en GC (véase la figura "Amplificación de moldes complejos"). A diferencia de otros aditivos de PCR de uso común, como el DMSO, Q-Solution se utiliza en una única concentración de trabajo, no es tóxico y la pureza de la PCR está garantizada. Añadir Q-Solution a la PCR no compromete la fidelidad de la misma.

Aplicaciones

- Plantillas genómicas complejas
- Plantillas de ADNc complejas (por ejemplo, RT-PCR)
- Objetivos con muy pocas copias (por ejemplo, PCR de una sola célula)
- Reacciones con múltiples pares de cebadores

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus es muy adecuada para una amplia variedad de aplicaciones, incluidas aplicaciones desafiantes como la amplificación de: