Qiagen, 203645, Kit de mezcla maestra HotStarTaq Plus (1000)

Para reacciones de 1000 x 20 μl: 12 x 0,85 ml de mezcla maestra HotStarTaq Plus (contiene 1000 unidades de ADN polimerasa HotStarTaq Plus, tampón de PCR con 3 mM de MgCl2 y 400 μM de cada dNTP), 4 x 0,55 ml de concentrado CoralLoad, 8 x 1,9 ml de agua sin ARNasa
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Características

- Tiempo de activación enzimática rápido de 5 minutos
- Menos pasos de pipeteo reducen el riesgo de contaminación.
- Alta especificidad de PCR sin necesidad de optimización
- Aditivo amortiguador opcional listo para cargar para un manejo más sencillo

Actuación

ADN polimerasa HotStarTaq Plus: ADN polimerasa HotStarTaq
Amplificación específica: ++
Optimización mínima de PCR: ++
Fácil de usar: +++
Velocidad de activación: ++

Cada lote de ADN polimerasa HotStarTaq Plus se somete a un exhaustivo control de calidad, que incluye un riguroso ensayo de especificidad y reproducibilidad de PCR en el que se amplifican dianas con un bajo número de copias. El kit de mezcla maestra HotStarTaq Plus supera a los kits de otros proveedores y garantiza una alta especificidad y un rendimiento superior en PCR de inicio en caliente (véanse las figuras "Máxima especificidad" y "Mayor especificidad con diferentes sistemas de cebador-molde" y la tabla). El innovador tampón de PCR incluido en el kit garantiza la especificidad en una amplia gama de condiciones de PCR, minimizando la necesidad de optimización. El concentrado CoralLoad, también incluido en el kit, ofrece mayor comodidad al mejorar la visibilidad del pipeteo y permitir la carga directa de los productos de PCR en un gel. El concentrado CoralLoad se puede añadir a la PCR sin afectar la sensibilidad ni la especificidad de la amplificación. Los fragmentos de PCR amplificados en presencia del concentrado CoralLoad se han probado con éxito para clonación y digestión por restricción sin purificación previa.

La combinación de alta especificidad y fácil manejo hace que el HotStarTaq Plus Master Mix Kit sea adecuado para su uso con plantillas genómicas o de ADNc complejas (véase la figura "Efecto del inicio en caliente en el rendimiento de la RT-PCR"), múltiples pares de cebadores (véase la figura "Amplificación específica en PCR multiplex") y plantillas aisladas de fuentes difíciles o dianas con un número muy bajo de copias (véase la figura "PCR unicelular de alta sensibilidad"). El HotStarTaq Plus Master Mix Kit también es adecuado para proyectos como el cribado genético, en los que se amplifican grandes cantidades de muestras.

Especificaciones de la ADN polimerasa HotStarTaq Plus

Concentración: 5 unidades/µl Enzima recombinante: Sí Análogos del sustrato: dNTP, ddNTP, dUTP, biotina-11-dUTP, DIG-11-dUTP, dNTP/ddNTP fluorescente Tasa de extensión: 2–4 kb/min a 72 °C Vida media: 10 min a 97 °C; 60 min a 94 °C Eficiencia de amplificación: ≥10 5 veces Actividad de exonucleasa 5'–>3': Sí Adición de A extra: Sí Actividad de exonucleasa 3'–>5': No Nucleasas contaminantes: No ARNasas contaminantes: No Proteasas contaminantes: No Actividad de autocebado: No

Principio

La mezcla maestra HotStarTaq Plus es una mezcla lista para usar de ADN polimerasa HotStarTaq Plus, tampón PCR QIAGEN, MgCl₂ y dNTP. La ADN polimerasa HotStarTaq Plus ofrece el rendimiento inigualable de la ADN polimerasa HotStarTaq con un tiempo de activación reducido a tan solo 5 minutos.

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus, una forma modificada de la ADN polimerasa Taq de QIAGEN, se suministra en estado inactivo, sin actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto evita la extensión de los cebadores annealed inespecíficamente y de los dímeros de cebador formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR y el ciclo inicial (véanse las figuras «Máxima especificidad» y «Alta especificidad con diferentes sistemas cebador-molde»). La ADN polimerasa HotStarTaq Plus se activa mediante una breve incubación de 5 minutos a 95 °C, que puede incorporarse fácilmente a cualquier programa de termociclador.

Tampón de PCR QIAGEN

El tampón de PCR QIAGEN mantiene la amplificación específica en cada ciclo de PCR al promover una alta proporción de unión de cebadores específicos e inespecíficos durante el paso de annealing en cada ciclo de PCR (véase la figura "Mayor especificidad del annealing de cebadores"). Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄)₂SO₄, este tampón proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de annealing y concentraciones de Mg₂+ que los tampones de PCR convencionales. Por lo tanto, la optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de annealing o la concentración de Mg₂+ suele ser mínima o inexistente.

Concentrado CoralLoad

El kit de mezcla maestra HotStarTaq Plus contiene CoralLoad Concentrate (véase la figura "Concentrado CoralLoad"), que contiene un reactivo de carga de gel y dos colorantes de seguimiento de gel. CoralLoad Concentrate mejora la visibilidad del pipeteo y facilita la estimación de la distancia de migración del ADN, así como la optimización del tiempo de ejecución en gel de agarosa. Al usar CoralLoad Concentrate, los productos de PCR se pueden cargar directamente en un gel de agarosa sin necesidad de añadir previamente el tampón de carga.

Aplicaciones

- Plantillas genómicas complejas
- Plantillas de ADNc complejas (por ejemplo, RT-PCR)
- Objetivos con muy pocas copias (por ejemplo, PCR de una sola célula)
- Reacciones con múltiples pares de cebadores

El kit de mezcla maestra HotStarTaq Plus es muy adecuado para una amplia variedad de aplicaciones, incluidas aplicaciones desafiantes como la amplificación de: