Qiagen, 204001, Kit de demostración de PCR Rotor-Gene SYBR Green (80)

Para 80 reacciones: 2x Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mix, 10x QuantiTect Primer Assay para GPER, Estándares, Muestras desconocidas, Buffer TE, Agua sin ARNasa

Características

- Evaluar el rendimiento de Rotor-Gene Q
- Determinar la precisión y reproducibilidad del Rotor-Gene Q
- Un sistema completo que contiene todos los componentes de la reacción.

Detalles del producto

El kit de demostración de PCR Rotor-Gene SYBR Green se utiliza para demostrar el rendimiento del Rotor-Gene Q. Contiene todos los componentes necesarios para cuantificar una diana de ADN genómico mediante PCR en tiempo real basada en SYBR Green. Estos incluyen estándares de ADN genómico prediluidos, dos muestras desconocidas, una mezcla maestra optimizada y un par de cebadores específicos para el gen del receptor de estrógeno acoplado a la proteína G 1 (GPER) humano. Con este kit, se puede evaluar la fiabilidad, reproducibilidad y sensibilidad de la cuantificación génica con el Rotor-Gene Q.

Principio

El Rotor-Gene Q y su exclusivo diseño rotatorio centrífugo permiten una cuantificación génica rápida y precisa. Los tubos de PCR se colocan en un rotor que los hace girar frente a una única fuente de luz de excitación y un único detector en una cámara de aire en movimiento. Esto significa que la variación óptica y de temperatura entre los tubos es mínima, lo que permite una alta precisión en la cuantificación por PCR en tiempo real. Además, como el rotor gira continuamente a 400 rpm, es posible la adquisición de datos a alta velocidad.

Con el kit de demostración de PCR Rotor-Gene SYBR Green, se garantiza una amplificación altamente específica gracias a una combinación equilibrada de iones que minimiza la hibridación inespecífica de cebadores (véase la figura "Hibridación específica de cebadores"). Se consigue un ciclado rápido sin comprometer el rendimiento utilizando Q-Bond, un novedoso aditivo para PCR que permite tiempos de ejecución del ciclador de tan solo 45 minutos (véase la figura "Hibridación rápida de cebadores").

Procedimiento

- Plantilla de ADN genómico humano de un número de copias definido
- Mezcla maestra de PCR Rotor-Gene SYBR Green
- Ensayo de cebadores QuantiTect específico para el gen del receptor de estrógeno 1 acoplado a proteína G (GPER) humano

Utilizando el kit de demostración de PCR SYBR Green de Rotor-Gene, se realiza una PCR en tiempo real basada en SYBR Green para cuantificar diferentes números de copias de una diana de ADN genómico. Cada reacción consta de:

El manual del kit de demostración de PCR SYBR Green de Rotor-Gene contiene tres protocolos. Los usuarios de Rotor-Gene pueden seguir el protocolo para la configuración manual de la reacción o el protocolo para la configuración automatizada de la reacción con QIAgility. Tras la configuración de la reacción, pueden continuar con el protocolo de PCR en tiempo real en el Rotor-Gene Q.

El pipeteo manual se puede evitar con QIAgility, un instrumento compacto de sobremesa que proporciona una configuración de PCR rápida y de alta precisión. Los errores en la configuración de la reacción debidos a errores humanos se reducen e incluso pueden eliminarse. QIAgility complementa a la perfección la combinación de los kits Rotor-Gene Q y Rotor-Gene, permitiendo dispensar fácilmente líquidos en tubos, tiras de tubos y discos Rotor.

Se genera una curva estándar a partir de los valores de CT obtenidos de un conjunto de estándares (2000, 1000, 500, 250 y 125 copias; cada estándar se analiza por cuadruplicado). Esta curva se utiliza para determinar el número de copias de dos muestras desconocidas (500 y 250 copias; se analizan 24 réplicas de cada muestra desconocida [al configurar la reacción manualmente, se puede configurar un mínimo de 4 réplicas por cada muestra desconocida]). Además, se realizan cuatro reacciones de control sin plantilla (NTC). Por lo tanto, se ejecutan un total de 72 reacciones simultáneamente en el Rotor-Gene Q.

Aplicaciones

El kit de demostración de PCR Rotor-Gene SYBR Green se utiliza para demostrar el rendimiento del Rotor-Gene Q. El kit también es compatible con Rotor-Gene 3000 o Rotor-Gene 6000. Con este kit, se puede evaluar la precisión y reproducibilidad de la cuantificación genética con Rotor-Gene Q.