Qiagen, 204256, Kit de PCR de sonda QuantiFast (2000)

NOTA IMPORTANTE: Como se anunció anteriormente, la producción de los kits QuantiFast se ha interrumpido desde mediados de 2021. Por lo tanto, estos productos estarán disponibles solo hasta agotar existencias.

Para reacciones de 2000 x 25 µl: 25 ml de 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix (contiene colorante ROX), 20 ml de agua sin ARNasa

Características

- Detección sensible incluso de objetivos con un bajo número de copias
- Detección precisa de una amplia gama de cantidades de plantillas
- Resultados más rápidos con un ahorro de tiempo de hasta el 60%
- Mezcla maestra optimizada y lista para usar para obtener resultados confiables sin optimización
- Un protocolo de ciclismo para todos los ciclistas estándar y rápidos

Detalles del producto

Los kits de PCR QuantiFast Probe ofrecen una cuantificación rápida y sensible de dianas de ADNg y ADNc mediante PCR en tiempo real y RT-PCR de dos pasos utilizando sondas específicas de secuencia. La tecnología Q-bond y una mezcla maestra optimizada permiten tiempos de ejecución de PCR en tiempo real más cortos, no solo en cicladores rápidos con tiempos de rampa cortos, sino también en cicladores estándar. La combinación de un sistema de inicio en caliente y un exclusivo tampón de PCR en la mezcla maestra lista para usar garantiza una qPCR altamente sensible en cualquier ciclador en tiempo real sin necesidad de optimización. Hay dos formatos de kit disponibles: el kit de PCR QuantiFast Probe para cicladores que requieren el colorante ROX para la normalización de la fluorescencia, y el kit de viales QuantiFast Probe PCR +ROX para el resto de cicladores. Para mayor comodidad, la mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C.

NOTA IMPORTANTE: Como se anunció anteriormente, la producción de los kits QuantiFast se ha interrumpido desde mediados de 2021. Por lo tanto, estos productos estarán disponibles solo hasta agotar existencias. Visite la página del kit sucesor para ver las características mejoradas o solicitar un kit de prueba.

Para obtener más información y preguntas frecuentes sobre esta transición, visite: www.qiagen.com/PCRresource .

Actuación

Valor medio de TC
ADNc de leucocitos humanos (ng): Kit de viales PCR +ROX de sonda QuantiFast
100: 29.13
10:32.50
1:36.15
Sin control de plantilla: 40,00

Valor medio de TC
ADNc de leucocitos humanos: Kit de viales PCR +ROX de sonda QuantiFast
100 ng: 11,99
10 ng: 15,54
1 ng: 19,22
100 pág.: 22,63
10 pág.: 26.43
1 pág.: 30.02
100 pies cuadrados: 33,42
Sin control de plantilla: 40
Eficiencia de PCR: 90%

Los kits de PCR QuantiFast Probe ofrecen resultados altamente sensibles, superando a otros kits de PCR en tiempo real (consulte la tabla "RT-PCR sensible de dos pasos en el iCycler iQ" y la figura ). Los tiempos de ejecución de PCR se reducen hasta en un 60 % (consulte la figura "Tiempos de PCR significativamente reducidos"), lo que le permite obtener resultados de PCR rápidos sin comprometer el rendimiento de la PCR (consulte la figura "Resultados más rápidos sin comprometer la sensibilidad"). También puede aumentar considerablemente el rendimiento de sus muestras o compartir eficientemente un termociclador con otros usuarios.

Los kits de PCR QuantiFast Probe permiten una cuantificación precisa en un amplio rango dinámico (véase la figura "Amplio rango dinámico y alta sensibilidad"). Se pueden detectar con fiabilidad diluciones de plantilla de hasta 7 logaritmos (véase la tabla "Detección de más de 7 logaritmos de plantilla en RT-PCR de dos pasos en LightCycler 2.0" y la figura "Detección de más de 7 logaritmos de plantilla").

Principio

Componente: Características y beneficios
ADN polimerasa HotStarTaq Plus: activación de 3 min a 95ºC
Tampón PCR de sonda QuantiFast: combinación equilibrada de iones NH 4 + y K +
Aditivo Q-Bond exclusivo: tiempos de ejecución de PCR más rápidos, lo que permite resultados más rápidos y más reacciones por día
Colorante ROX †: Normaliza las señales fluorescentes en los instrumentos Applied Biosystems y, opcionalmente, en los de Agilent

Los kits de PCR QuantiFast Probe ofrecen resultados rápidos y de alta sensibilidad en un amplio rango dinámico, tanto en cicladores estándar como rápidos. Están diseñados para su uso con todo tipo de sondas específicas de secuencia, incluyendo sondas de detección de hidrólisis (p. ej., TaqMan y otras sondas de doble marcado) y sondas FRET. Un tampón de PCR rápido especialmente desarrollado contiene el novedoso aditivo Q-Bond, que reduce significativamente los tiempos de desnaturalización, annealing y extensión (véase la figura "Annealing rápido de cebadores"). El tampón también contiene una combinación equilibrada de iones K+ y NH₄+, que promueven el annealing específico de cebadores, lo que permite una alta especificidad y sensibilidad de PCR (véase la figura "Annealing específico de cebadores"). Además, la ADN polimerasa HotStarTaq Plus proporciona un arranque en caliente riguroso, lo que previene la formación de productos inespecíficos.

Procedimiento

Tinte ROX: Kit
Se suministra en mezcla maestra: Kit de PCR de sonda QuantiFast
Se suministra en un tubo separado: Kit de viales PCR +ROX de sonda QuantiFast

Los kits de PCR QuantiFast Probe contienen mezclas maestras listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Simplemente añada el ADN molde, los cebadores y la sonda a la mezcla maestra y siga el protocolo del manual para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real. Los kits están disponibles con o sin el colorante de referencia pasivo ROX en la mezcla maestra, lo que permite su uso en prácticamente cualquier termociclador en tiempo real (véase la tabla). Gracias a las concentraciones optimizadas de ROX, se detectan incluso números de copias bajos mediante el análisis automático de datos.

Para obtener resultados óptimos en la RT-PCR de dos pasos en tiempo real, recomendamos sintetizar ADNc con el kit de transcripción inversa QuantiTect. Este kit permite una síntesis rápida de ADNc en tan solo 20 minutos, con eliminación integrada de la contaminación del ADN genómico.

Los ensayos de sonda QuantiFast son ensayos prediseñados de todo el genoma que utilizan detección por hidrólisis basada en sonda. Se entregan con el kit de PCR de sonda QuantiFast para obtener resultados garantizados en qRT-PCR singleplex de dos pasos.

Aplicaciones

Los kits de PCR con sonda QuantiFast se pueden utilizar para el análisis de la expresión génica mediante sonda de dianas de ADNc y el análisis cuantitativo de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Esto incluye instrumentos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche y Agilent. Para el Rotor-Gene Q y otros termocicladores Rotor-Gene, recomendamos el kit de PCR con sonda Rotor-Gene, especialmente desarrollado para el ciclado rápido en estos instrumentos.