Qiagen, 204654, Kit de PCR multiplex QuantiFast (400)

NOTA IMPORTANTE: Como se anunció anteriormente, la producción de los kits QuantiFast se ha interrumpido desde mediados de 2021. Por lo tanto, estos productos estarán disponibles solo hasta agotar existencias.

Para reacciones de 400 x 25 µl: 3 x 1,7 ml 2x QuantiFast Multiplex PCR Master Mix (con colorante ROX), 2 x 2 ml de agua sin ARNasa

Características

- Detección sensible de hasta 4 objetivos en 1 tubo
- Resultados más rápidos con un ahorro de tiempo de hasta el 50%
- PCR multiplex exitosa sin necesidad de optimización
- Cuantificación confiable de objetivos de baja y alta abundancia

Detalles del producto

Los kits de PCR multiplex QuantiFast permiten la cuantificación rápida y fiable de hasta 4 dianas de ADNc o ADNg en un solo tubo mediante PCR multiplex, PCR en tiempo real o RT-PCR de dos pasos. La tecnología Q-bond y una mezcla maestra optimizada facilitan una PCR multiplex rápida en tiempo real, no solo en cicladores rápidos con tiempos de rampa cortos, sino también en cicladores estándar. La combinación de un sistema de inicio en caliente y un exclusivo tampón de PCR en la mezcla maestra lista para usar garantiza una qPCR de alta sensibilidad en cualquier ciclador en tiempo real sin necesidad de optimización. Hay dos formatos de kit disponibles: el kit de PCR multiplex QuantiFast para cicladores que requieren el colorante ROX para la normalización de la fluorescencia, y el kit de PCR multiplex QuantiFast +R para el resto de cicladores. Para mayor comodidad, la mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C.

NOTA IMPORTANTE: Como se anunció anteriormente, la producción de los kits QuantiFast se ha interrumpido desde mediados de 2021. Por lo tanto, estos productos estarán disponibles solo hasta agotar existencias. Visite la página del kit sucesor para ver las características mejoradas o solicitar un kit de prueba.

Para obtener más información y preguntas frecuentes sobre esta transición, visite: www.qiagen.com/PCRresource .

Actuación

La mezcla maestra especial que se incluye con los kits QuantiFast Multiplex PCR permite una rápida configuración de las reacciones multiplex y proporciona resultados satisfactorios a la primera, proporcionando datos de PCR multiplex comparables a los de PCR singleplex (véase la figura "Resultados comparables en PCR triplex y singleplex"). Los kits pueden distinguir claramente pequeñas diferencias en la cantidad de plantilla. Incluso con diferencias de dos veces en la cantidad de plantilla, los kits QuantiFast Multiplex PCR proporcionan una cuantificación precisa de dianas con abundancias muy variables (véase la figura "Valores de CT lineales tras disminuciones de dos veces en la plantilla").

Los kits de PCR multiplex QuantiFast reducen los tiempos de ejecución de PCR hasta en un 50 %, lo que permite obtener resultados significativamente más rápido (véase la figura "Tiempos de PCR significativamente reducidos"). Se pueden detectar tan solo 10 copias de la diana en tan solo 60 minutos (véase la figura "PCR dúplex sensible y amplio rango dinámico"). También puede aumentar considerablemente el rendimiento de sus muestras o compartir eficientemente un ciclador con otros usuarios. Se obtienen resultados rápidos en PCR multiplex en tiempo real de hasta 4 dianas sin comprometer el rendimiento (véase la figura "Sensibilidad sin concesiones").

Principio

Componente: Características
ADN polimerasa HotStarTaq Plus: activación de 5 min a 95ºC
Tampón PCR multiplex QuantiFast: combinación equilibrada de iones NH 4 + y K +
Factor sintético MP: análisis multiplexado fiable de hasta 4 genes en el mismo tubo
Aditivo Q-Bond exclusivo: tiempos de ejecución de PCR más rápidos, lo que permite resultados más rápidos y más reacciones por día
Colorante ROX †: Normaliza las señales fluorescentes en los instrumentos Applied Biosystems y, opcionalmente, en los de Agilent

Los kits de PCR multiplex QuantiFast ofrecen resultados altamente sensibles y rápidos en un amplio rango dinámico, tanto en cicladores estándar como rápidos, sin optimización (véase el diagrama de flujo "Kits multiplex QIAGEN"). El tampón de PCR rápida, especialmente desarrollado, contiene el novedoso aditivo Q-Bond, que reduce significativamente los tiempos de desnaturalización, annealing y extensión (véase la figura "Annealing rápido de cebadores").

La amplificación de los genes de referencia y diana en la misma reacción, en lugar de hacerlo por separado, aumenta la fiabilidad de la cuantificación génica al minimizar los errores de manipulación. El tampón de PCR multiplex QuantiFast incluye una combinación equilibrada de iones K+ y NH₄, así como el exclusivo factor sintético MP, que, en conjunto, promueven una hibridación estable y eficiente de cebadores y sondas con el ácido nucleico molde, lo que permite una alta eficiencia de la PCR (véase la figura "Tampón de PCR único"). Además, la ADN polimerasa HotStarTaq Plus proporciona un arranque en caliente riguroso, lo que previene la formación de productos inespecíficos.

Procedimiento

Tinte ROX: Kit
Se suministra en mezcla maestra: Kit de PCR multiplex QuantiFast
Se suministra en un tubo separado: Kit QuantiFast Multiplex PCR +R

Los kits de PCR multiplex QuantiFast contienen mezclas maestras listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Simplemente añada el ADN molde y los conjuntos de cebadores y sondas a la mezcla maestra y siga el protocolo del manual para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real. Los kits están disponibles con o sin el colorante de referencia pasivo ROX en la mezcla maestra, lo que permite su uso en prácticamente cualquier termociclador en tiempo real (véase la tabla). Gracias a las concentraciones optimizadas de ROX, se detectan incluso números de copias bajos mediante el análisis automático de datos.

Para obtener resultados óptimos en RT-PCR de dos pasos en tiempo real, recomendamos sintetizar ADNc utilizando el kit de transcripción inversa QuantiTect, que proporciona una síntesis rápida de ADNc en solo 20 minutos con eliminación integrada de la contaminación del ADN genómico.

Los ensayos de sonda QuantiFast son ensayos prediseñados de todo el genoma que utilizan detección por hidrólisis basada en sonda. Se entregan con el kit de PCR multiplex QuantiFast para obtener resultados garantizados en RT-PCR dúplex en tiempo real de dos pasos.

Aplicaciones

Los kits de PCR multiplex QuantiFast permiten el análisis multiplex de la expresión génica de dianas de ADNc o ADNg en cualquier termociclador en tiempo real, incluyendo instrumentos de Agilent, Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf y Roche. Para el Rotor-Gene Q y otros termocicladores Rotor-Gene, recomendamos el kit de PCR multiplex Rotor-Gene, especialmente desarrollado para el ciclado rápido en estos instrumentos.