Qiagen, 205111, Kit Omniscript RT (50)

Para 50 reacciones de transcripción inversa: 200 unidades de transcriptasa inversa Omniscript, 150 µl de tampón RT 10x, 100 µl de mezcla de dNTP (contiene 5 mM de cada dNTP), 1,1 ml de agua sin ARNasa

Características

- Altos rendimientos de ADNc debido a la enzima de alta afinidad
- Detección sensible de tan solo 10 copias de plantilla
- No se requiere ningún paso adicional de digestión con ARNasa H
- Procedimiento rápido y sencillo sin tediosos pasos de pipeteo.

Actuación

La alta afinidad de la transcriptasa inversa Omniscript (RT) da como resultado una RT-PCR altamente específica y sensible, incluso con transcripciones de bajo número de copias (ver figura "RT-PCR sensible de ≥10 copias"), y la capacidad de leer incluso estructuras secundarias de ARN complejas sin ajustar la temperatura o las condiciones de reacción (ver figura "Comparación de varias transcriptasas inversas").

Las regiones de ARN con alto contenido de GC pueden provocar que otras transcriptasas inversas se detengan, se disocien del molde de ARN o se salten las regiones de ARN con bucles (véase la figura "Productos de RT-PCR de longitud completa — B"). Sin embargo, estas plantillas complejas no suponen un problema para las transcriptasas inversas de QIAGEN (véase la figura "Productos de RT-PCR de longitud completa — A"). Sin necesidad de optimización, el kit Omniscript RT permite realizar la transcripción inversa prácticamente sin problemas.

Principio

La transcriptasa inversa (RT) Omniscript posee una alta afinidad por el ARN, lo que permite una transcripción inversa eficiente y sensible de cualquier molde, lo que resulta en una alta producción de ADNc. Se suministra lista para usar con dNTP y en un tampón de reacción optimizado que, junto con la alta afinidad de la RT Omniscript por el ARN, permite la lectura directa de moldes con alto contenido de GC o estructura secundaria compleja. Tenga en cuenta que no se incluye la mezcla de cebadores.

Omniscript RT está especialmente diseñada para todo tipo de transcripción inversa con cualquier cantidad de ARN, desde 50 ng hasta 2 µg por reacción. Omniscript RT también suele ser la enzima preferida con ARN viral debido a la presencia de ARN transportador en la mayoría de las preparaciones de ARN viral. En experimentos comparativos, Omniscript RT supera consistentemente a otras transcriptasas inversas en un amplio rango de cantidades iniciales de ARN.

La reproducibilidad entre lotes de los kits Omniscript está garantizada por un riguroso control de calidad en QIAGEN. El tampón RT optimizado, los dNTP y el agua incluidos en todos los kits Omniscript RT están garantizados libres de ARNasa, y cada lote de Omniscript RT se somete a rigurosas pruebas de reproducibilidad por RT-PCR.

Aplicaciones

- Síntesis de ADNc para PCR de punto final
- Síntesis de ADNc bicatenario para clonación
- RACE (Amplificación rápida de extremos de ADNc)
- Amplificación lineal de ARN
- Amplificación exponencial de ARN
- SAGE (Análisis serial de expresión genética)
- Etiquetado para microarrays
- Análisis del sitio de inicio de la transcripción mediante extensión del cebador

La transcriptasa inversa Omniscript es adecuada para su uso en las siguientes aplicaciones: