Qiagen, 205824, Sonda de ensayo QuantiNova IC roja 650 (500)

Mezcla de cebador/sonda de 1000 µl (10x) para 500 reacciones. El ensayo de sonda IC rojo (etiqueta análoga a Cy5) detecta el ARN de control interno y el ADN de control interno de QuantiNova.

Características

- Eliminar artefactos utilizando la mezcla de eliminación de gDNA
- Monitorizar la síntesis exitosa de ADNc utilizando el control interno
- Sintetizar ADNc en un amplio rango lineal con transcriptasa de alta afinidad

Detalles del producto

El kit de transcripción inversa QuantiNova ofrece un procedimiento rápido y práctico para la síntesis de ADNc con eliminación integrada de ADN genómico y un control interno adicional. La mezcla de eliminación de ADNg elimina eficazmente la contaminación por ADN genómico en muestras de ARN. El kit de transcripción inversa QuantiNova proporciona todo lo necesario para una transcripción inversa rápida y eficiente. El ADNc sintetizado está optimizado para su uso en PCR en tiempo real, lo que permite una cuantificación fiable de dianas en todas las regiones de los transcritos de ARNm.

El ARN de control interno puede utilizarse para comprobar la eficacia de la transcripción inversa y la amplificación mediante el ensayo de sonda QuantiNova IC (marca Max, n.º de cat. 205813) o el ensayo de sonda QuantiNova IC Red 650 (marca análoga a Cy5, n.º de cat. 205824) para la detección con sonda. Para la detección con SYBR Green, solicite el ensayo QuantiNova IC SYBR Green a través de nuestra plataforma GeneGlobe (disponible con el nombre HS_QIC_2467742, ensayo de referencia QuantiNova LNA PCR y el ID GeneGlobe: SBH1218551).

Principio

Componente: Beneficios
Mezcla de eliminación de gDNA: detección de ARN únicamente en RT-PCR en tiempo real
ARN de control interno: verificación del rendimiento exitoso de la RT-PCR
Transcriptasa inversa QuantiNova: uso de una amplia gama de cantidades de ARN (10 pg – 5 μg de ARN) Alta sensibilidad
Sistema de tampón QuantiNova RT: lectura de plantillas difíciles
RT Primer Mix: síntesis de ADNc de todas las regiones de las transcripciones, incluso de las regiones 5'

La transcriptasa inversa QuantiNova tiene una alta afinidad por el ARN y es capaz de sintetizar ADNc a partir de una amplia gama de cantidades de ARN (10 pg – 5 μg) (ver figura “Cuantificación precisa de 5 µg – 10 pg de ARN”). El kit proporciona altos rendimientos de plantilla de ADNc para el análisis de PCR en tiempo real, independientemente de dónde se encuentre la región diana amplificada en la transcripción. Incluso las plantillas difíciles, como aquellas con alto contenido de GC o estructura secundaria compleja, se transcriben de forma inversa con éxito. El tampón RT QuantiNova también se ha optimizado para ser compatible con los tampones de PCR en tiempo real. Para obtener resultados precisos en los ensayos de expresión génica RT-PCR en tiempo real, es importante que solo se amplifique y detecte el ADNc. La interferencia del ADN genómico se puede eliminar de forma eficaz y rápida utilizando la mezcla de eliminación de ADNg (ver figura “La eliminación eficiente del ADNg contaminante garantiza la cuantificación precisa de las transcripciones”). Se ahorra tiempo y se reducen costos, ya que no se requiere una digestión separada con DNasa durante o después de la purificación de muestras de ARN. Además, no es necesario diseñar cebadores o sondas específicos de ARN. Detectar variaciones en la síntesis de ADNc le permite verificar la reproducibilidad de sus resultados. El control interno desarrollado recientemente es una transcripción definida (molécula de ARN) que puede agregarse opcionalmente a sus muestras y transcribirse a ADNc. Está diseñado para informar fallas del instrumento o químicas, errores en la configuración del ensayo y la presencia de inhibidores. Dado que el control interno se comporta de manera comparable a las transcripciones reales, puede usarse para confirmar el éxito de la transcripción inversa y la amplificación en qPCR posteriores (ver figura "El control interno detecta de manera confiable la presencia de inhibidores").

Procedimiento

La extracción de ADN genómico y la síntesis de ADNc se realizan en tan solo 20 minutos con el kit de transcripción inversa QuantiNova. El kit incluye todo lo necesario para una síntesis rápida de ADNc.

El ARN purificado se incuba brevemente en la mezcla de eliminación de ADNg para eliminar eficazmente el ADN genómico contaminante. A diferencia de otros métodos, la muestra de ARN se utiliza directamente para la transcripción inversa en combinación con una mezcla maestra preparada con la mezcla de transcripción inversa y la enzima de transcripción inversa. Con la transcriptasa inversa QuantiNova, el ARN puede transcribirse a bajas temperaturas, incluso a través de una estructura secundaria compleja. Esto garantiza que el ARN se mantenga intacto, ya que la reacción se lleva a cabo a 42 °C y se inactiva posteriormente a 85 °C. No se requieren pasos adicionales para la desnaturalización del ARN ni la digestión con ARNasa H.

El ARN de control interno (CI) se puede transcribir simultáneamente con la muestra de ARN y está destinado a informar la presencia de inhibidores, fallas del instrumento o de la química o errores en la configuración del ensayo.

El ensayo de sonda IC QuantiNova (etiqueta Max, n.° de cat. 205813) o el ensayo de sonda IC QuantiNova Red 650 (etiqueta análoga Cy5, n.° de cat. 205824) se utilizan para procedimientos de detección basados ​​en sonda del ARN o ADN de control interno proporcionado en el kit de transcripción inversa QuantiNova, el kit de RT-PCR de sonda QuantiNova (RT-PCR de un solo paso) o el kit QuantiNova Pathogen +IC.

El ensayo QuantiNova IC SYBR Green (n.º de cat. SBH1218551) se utiliza junto con el ARN de control interno incluido en el kit de transcripción inversa QuantiNova (RT-PCR de dos pasos), el kit QuantiNova SYBR Green RT-PCR (RT-PCR de un paso) y el kit QIAcuity OneStep Eva Green. Permite evaluar el rendimiento de la transcripción inversa/amplificación utilizando el kit QuantiNova SYBR Green PCR (RT-PCR de dos pasos), el kit QuantiNova SYBR Green RT-PCR (RT-PCR de un paso), el kit QIAcuity OneStep Eva Green o los paneles personalizados QuantiNova LNA PCR.

Para optimizar el flujo de trabajo, recomendamos combinar los kits QuantiNova con nuestros ensayos o paneles de PCR en tiempo real QuantiNova prediseñados. Estos ofrecen una cuantificación precisa de ARNm o transcripciones largas de ARN no codificante, independientemente de su abundancia. Elija entre una amplia gama de conjuntos de cebadores prediseñados para humanos, ratones y ratas, o personalice sus propios ensayos y paneles con nuestras herramientas de diseño avanzadas.

Nuestros ensayos QuantiNova LNA PCR y QuantiNova LNA Probe PCR utilizan tecnología LNA para una mayor sensibilidad, lo que permite obtener perfiles de expresión genética imparciales y conocimientos científicos más rápidos.

Nota: El ensayo QuantiNova IC SYBR Green anteriormente estaba disponible como ensayo QuantiTect Primer para la detección basada en SYBR de ARN IC (cat. n.° QT02589307).