Qiagen, 206047, Kit de PCR de sondas SNP Type-it Fast (4000)

Para reacciones de 4000 x 25 μl: 2 x 25 ml de 2x Type-it Fast SNP Probe PCR Master Mix, 5x Q-Solution, agua sin ARNasa

Características

- Validado mediante ensayos de genotipificación de SNP TaqMan®
- Llamada automatizada de alelos y grupos de fluorescencia ajustados
- Adecuado para loci SNP difíciles o cantidades de plantilla muy bajas
- Hasta un 40% de ahorro de tiempo gracias al procedimiento de ciclo rápido

Actuación

El kit de PCR de sonda SNP Type-it Fast garantiza de forma constante una genotipificación de SNP altamente precisa.

Unión altamente estricta y específica de la sonda específica del alelo

La mezcla maestra para PCR de genotipado de SNP Type-it Fast se basa en la ADN polimerasa HotStarTaq Plus de alta especificidad y en un nuevo sistema de tampón para PCR de genotipado de SNP. Ambos permiten una unión de sondas altamente específica y señales fluorescentes intensas y consistentes. En comparación con otras mezclas maestras para genotipado de SNP disponibles comercialmente, se obtiene una separación más amplia y clara de los grupos de alelos (véase la figura "Unión de sondas altamente específica").

Altas tarifas de llamadas incluso para cantidades bajas de plantillas

Incluso con dianas complejas o loci de SNP complejos, el kit de PCR Type-it Fast SNP Probe proporciona una genotipificación de SNP fiable: se logran grupos de alelos bien separados y una agrupación precisa de alelos idénticos, lo que resulta en altas tasas de llamada (véase la figura "Llamada automatizada de alelos exitosa"). El kit de PCR Type-it Fast SNP Probe superó a los kits probados de otros proveedores, garantizando una agrupación precisa de alelos, incluso con 1 ng de ADN molde (véase la figura "Genotipificación fiable de SNP con pequeñas cantidades de ADN molde").

Principio

Contenido del kit: Características
Formato 2x Master Mix*: Desarrollado para la genotipificación de SNP con sondas TaqMan® MGB Adecuado para su uso con todos los cicladores adecuados para la genotipificación de SNP
ADN polimerasa HotStarTaq Plus: configuración de reacción rápida y sencilla a temperatura ambiente. Amplificación altamente específica, incluso con bajas cantidades de plantilla.
Buffer PCR de sonda SNP Type-it Fast: Amplia separación de grupos de genotipos Grupos de alelos compactos y altas tasas de llamada de alelos Mayor especificidad en la unión de la sonda Ciclado rápido debido a la molécula Q-Bond
Solución Q: Clústeres más compactos y señales más altas en el análisis de diagramas de dispersión para loci SNP altamente ricos en GC. Puede mejorar aún más la identificación de alelos subóptimos.

El kit de PCR Type-it Fast SNP Probe está disponible en un práctico formato de mezcla maestra que contiene la polimerasa HotStarTaq Plus de alta especificidad y un exclusivo sistema de tampón para genotipado de SNP, diseñado para una amplificación rápida y eficiente. Los componentes únicos del kit proporcionan una agrupación precisa de alelos y una separación excepcional para garantizar altas tasas de identificación, lo que permite obtener resultados reproducibles y precisos (véase la tabla).

Alta especificidad y sensibilidad

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus, incluida en la mezcla maestra, garantiza una amplificación altamente específica, incluso con bajas cantidades de plantilla. La ADN polimerasa HotStarTaq Plus se suministra en estado inactivo, sin actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto previene la formación de productos mal cebados y dímeros de cebadores a bajas temperaturas.

Sistema de amortiguación único

El tampón de PCR Type-it Fast SNP, también incluido en la mezcla maestra, está diseñado específicamente para la genotipificación de SNP de ciclo rápido mediante sondas de nucleasa 5' específicas de secuencia. Su composición única garantiza una unión altamente rigurosa y específica de la sonda específica del alelo (sonda de coincidencia). Esto se debe a la alteración del comportamiento de fusión de las sondas, lo que resulta en una ventana de temperatura de fusión más estrecha. Basada en el tampón de PCR original de QIAGEN, esta innovadora formulación permite una alta proporción de unión de cebadores específicos e inespecíficos durante el breve paso de annealing de cada ciclo de PCR. Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄)₂SO₄, el tampón de PCR proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de annealing y concentraciones de Mg₂+ que los tampones de PCR convencionales. La optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de annealing o la concentración de Mg₂+ se reduce drásticamente y, a menudo, no es necesaria.

Los aditivos del tampón de PCR Type-it Fast SNP, como Q-Solution, proporcionan las condiciones de reacción para la amplificación de regiones genómicas y loci de SNP complejos. La innovadora tecnología Q-Bond (para ciclado rápido) permite obtener resultados de genotipado de SNP con mayor rapidez (véase la figura "Mecanismo del ciclado rápido durante el annealing"). La mezcla maestra también contiene el colorante ROX en una concentración compatible con el genotipado de SNP en todos los instrumentos de Applied Biosystems. Sin embargo, el colorante ROX también es compatible con otros instrumentos que no requieren ROX como colorante de referencia pasivo (véase la tabla).

Procedimiento

Ciclistas: Modelo
Cicladores de PCR en tiempo real: QIAGEN: Rotor-Gene Q ABI PRISM 7900 (todas las series) ABI StepOne y StepOne Plus Applied Biosystems 7500 (todas las series) Applied Biosystems ViiA 7 Bio-Rad: iCycler iQ Bio-Rad: serie CFX Roche: LightCycler 480 Roche: LightCycler Nano Agilent: Mx3000P y Mx3005P
Cicladores estándar: Todos los cicladores en modos de rampa estándar (por ejemplo, GeneAmp 9700) Todos los cicladores en modos de rampa rápida (por ejemplo, GeneAmp 9800)

El kit de PCR Type-it Fast SNP Probe está verificado funcionalmente con ensayos de genotipado de SNP disponibles comercialmente y es compatible con sondas TaqMan® MGB, así como con ensayos basados ​​en sondas desarrollados por el usuario, que incluyen TaqMan® MGB, TaqMan® u otras sondas de doble marcado. El kit incluye protocolos optimizados para un análisis rápido y fiable.

Procedimiento de ciclo rápido para obtener resultados directos

La mezcla maestra para PCR Type-it Fast SNP Probe proporciona las condiciones de reacción para PCR de ciclado rápido utilizando sondas específicas de secuencia. El tampón incluye la molécula Q-Bond patentada, que permite tiempos de ciclado cortos en cicladores estándar y en cicladores rápidos con tasas de rampa rápidas. El procedimiento de ciclado rápido aumenta el rendimiento al reducir los tiempos de ejecución de PCR hasta en un 40 % (véase la figura "Flujo de trabajo de genotipado").

Formato de kit conveniente

El kit se suministra en formato de mezcla maestra preoptimizada y lista para usar para mayor comodidad. El uso de una mezcla maestra ahorra tiempo, simplifica la manipulación para la preparación de la reacción y aumenta la reproducibilidad al eliminar muchas posibles fuentes de errores de pipeteo y contaminación: se minimizan los pasos de pipeteo y se eliminan los cálculos tediosos. La ADN polimerasa HotStarTaq Plus (incluida en la mezcla maestra) se activa mediante un paso de incubación de 5 minutos a 95 °C, que puede incorporarse fácilmente a los programas de termociclado existentes. La preparación de la reacción a temperatura ambiente con la mezcla maestra es rápida y sencilla.

Instrumentos adecuados

El kit de PCR de sonda SNP Type-it Fast está optimizado para la amplificación de ensayos de PCR de SNP en cualquier ciclador de rampa rápida y estándar adecuado compatible con placas de PCR ópticas que se adaptan a instrumentos de PCR en tiempo real utilizados para el análisis de lecturas de placas de fluorescencia (ver tabla).

Aplicaciones

- Tipificación de loci de enfermedades
- Descubrimiento de biomarcadores

El kit de PCR de sonda SNP Type-it Fast se utiliza para detectar SNP mediante sondas TaqMan® MGB y se puede utilizar en varios campos de investigación, incluidos: