Qiagen, 206143, Kit de PCR multiplex de QIAGEN (100) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

Para 100 reacciones de PCR multiplex de 50 µl: 2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (que proporciona una concentración final de 3 mM MgCl2, 3 x 0,85 ml), 5x Q-Solution (1 x 2,0 ml), agua sin ARNasa (2 x 1,7 ml)
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Características

- No requiere optimización
- Alta especificidad y sensibilidad con arranque en caliente incorporado
- Muy adecuado para muchos tipos de aplicaciones de PCR multiplex
- Fácil de usar y rentable.

Actuación

El kit QIAGEN Multiplex PCR superó a los kits probados de otros proveedores y garantiza una amplificación por PCR multiplex altamente específica y sensible (véase la figura "PCR de 16 plexos exitosa"). El kit se puede utilizar con éxito para diversas aplicaciones multiplex, como la tipificación de organismos transgénicos (véase la figura "Genotipificación de ratones transgénicos") y el análisis de microsatélites (véase la figura "Análisis de microsatélites exitoso"). La mezcla maestra incluye la ADN polimerasa HotStarTaq para una amplificación eficiente de múltiples dianas en paralelo. La eficiencia de la amplificación se mejora aún más gracias a un innovador tampón de PCR, también incluido en la mezcla maestra. Este exclusivo tampón garantiza la especificidad de la PCR en una amplia gama de condiciones de PCR, minimizando la necesidad de optimización. La PCR subóptima se puede mejorar con Q-Solution, un aditivo para la amplificación de moldes ricos en GC, también incluido en el kit.

Especificaciones de la ADN polimerasa HotStarTaq

Concentración: 5 unidades/µl Enzima recombinante: Sí Análogos del sustrato: dNTP, ddNTP, dUTP, biotina-11-dUTP, DIG-11-dUTP, dNTP/ddNTP fluorescente Tasa de extensión: 2–4 kb/min a 72 °C Vida media: 10 min a 97 °C; 60 min a 94 °C Eficiencia de amplificación: ≥10 5 veces Actividad de exonucleasa 5'–>3': Sí Adición de A extra: Sí Actividad de exonucleasa 3'–>5': No Nucleasas contaminantes: No ARNasas contaminantes: No Proteasas contaminantes: No Actividad de autocebado: No >

Principio

El kit QIAGEN Multiplex PCR es el primer kit desarrollado específicamente para PCR multiplex y se presenta en un formato de mezcla maestra fácil de usar. La mezcla maestra QIAGEN Multiplex PCR contiene concentraciones preoptimizadas de ADN polimerasa HotStarTaq y MgCl₂, además de dNTP y un innovador tampón de PCR especialmente desarrollado para PCR multiplex. El kit permite realizar PCR multiplex con éxito desde el primer intento. No es necesario optimizar las condiciones de reacción (p. ej., las concentraciones de cebadores, Mg₂₂ y ADN polimerasa Taq) ni los parámetros de ciclado gracias a los exclusivos reactivos preoptimizados incluidos en el kit.

ADN polimerasa HotStarTaq

La ADN polimerasa HotStarTaq es una forma modificada de la ADN polimerasa Taq y no presenta actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto impide la extensión de los cebadores hibridados inespecíficamente y los dímeros de cebadores formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR y el ciclo inicial. La ADN polimerasa HotStarTaq se activa mediante una incubación de 15 minutos a 95 °C, que puede incorporarse a cualquier programa de termociclador.

Tampón de PCR multiplex

Este tampón especial contiene una combinación optimizada de K+ y NH₄₃, así como el exclusivo aditivo de PCR, Factor MP, que aumenta la concentración local de cebadores en la plantilla. Junto con K+ y otros cationes, Factor MP estabiliza los cebadores unidos específicamente, lo que permite una extensión eficiente de cebadores mediante la ADN polimerasa HotStarTaq (véase la figura "Hibridación de cebadores estable y eficiente"). Este innovador tampón mantiene la amplificación específica en cada ciclo de PCR al promover una alta proporción de unión de cebadores específicos a inespecíficos durante el paso de hibridación en cada ciclo de PCR. Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄₃)₂SO₄, el tampón proporciona condiciones rigurosas de hibridación de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de hibridación y concentraciones de Mg₂₃ que los tampones de PCR convencionales. Por lo tanto, la optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de hibridación o la concentración de Mg₂₃ suele ser mínima o inexistente.

Solución Q

Q-Solution, un innovador aditivo para PCR que facilita la amplificación de moldes complejos modificando el comportamiento de fusión del ADN, también se incluye con la ADN polimerasa HotStarTaq. Este reactivo único mejora la PCR subóptima causada por moldes con un alto grado de estructura secundaria o ricos en GC. A diferencia de otros aditivos para PCR de uso común, como el DMSO, Q-Solution se utiliza en una única concentración de trabajo, no es tóxico y garantiza la pureza de la PCR.

Procedimiento

El kit QIAGEN Multiplex PCR se suministra en una mezcla maestra preoptimizada y lista para usar para mayor comodidad. El uso de una mezcla maestra ahorra tiempo, simplifica la manipulación para la preparación de la reacción y aumenta la reproducibilidad al eliminar muchas posibles fuentes de errores de pipeteo y contaminación: se minimizan los pasos de pipeteo y se eliminan los cálculos tediosos. Solo es necesario añadir los cebadores y la plantilla para preparar la mezcla de amplificación final. La mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C, lo que permite una preparación aún más rápida de los ensayos de PCR multiplex. El protocolo simplificado paso a paso incluido en el kit garantiza una configuración de PCR rápida y sencilla. Las reacciones se pueden preparar a temperatura ambiente, lo que garantiza una mayor comodidad y facilidad de uso. La ADN polimerasa HotStarTaq se activa mediante un paso de incubación de 15 minutos a 95 °C, que puede incorporarse fácilmente a los programas de termociclado existentes.

Aplicaciones

- Tipificación y análisis de organismos transgénicos
- Amplificación y análisis de microsatélites
- Tipificación y detección de bacterias y virus
- Amplificación de múltiples regiones de ADN para análisis de SNP

El kit PCR multiplex de QIAGEN es ideal para diversas aplicaciones multiplex, entre las que se incluyen: