Qiagen, 206152, Kit PCR Multiplex Plus de QIAGEN (100)

Para 100 reacciones de PCR multiplex de 50 μl: 2x Multiplex PCR Master Mix (3 x 0,85 ml), 5x Q-Solution (1 x 2 ml), RNase-Free Water (2 x 1,9 ml), 10x CoralLoad Dye (1 x 1,2 ml)

Características

- PCR multiplex exitosa para aplicaciones avanzadas
- Resultados consistentes y confiables
- Establecimiento rápido de ensayos de PCR multiplex sin optimización
- Tiempos de reacción más rápidos y mayor comodidad.

Actuación

Fuente de ADN o ADNc: Aplicación
Plantas, animales/humanos: Análisis de ADN satélite (p. ej., análisis STR o VNTR) Tipificación de plantas/animales transgénicos Análisis de linaje (p. ej., de animales de granja) Análisis de OGM Detección de patógenos Análisis de alimentos Determinación del sexo Detección de mutaciones Amplificación de loci SNP Análisis genético cualitativo y semicuantitativo Identificación de isoformas de empalme
Bacterias/virus: Análisis de higiene Detección de patógenos Genotipificación microbiana
Muestras ambientales: Estudio de metagenomas
Otros: Agrupación de ensayos singleplex (ahorro de tiempo y costos) Enriquecimiento de objetivos para secuenciación de alto rendimiento de ADN antiguo Expresión genética

El kit QIAGEN Multiplex PCR Plus se basa en la tecnología patentada de PCR multiplex de QIAGEN y garantiza el éxito de la PCR a la primera. La mezcla maestra preoptimizada incluye la ADN polimerasa HotStarTaq Plus y un innovador sistema de tampón para PCR, especialmente desarrollado para la PCR multiplex. El riguroso mecanismo de arranque en caliente que proporciona la ADN polimerasa HotStarTaq Plus y la composición única del tampón aumentan la especificidad de la reacción multiplex al evitar la extensión de cebadores y dímeros de cebadores con hibridación inespecífica.

Alta especificidad y sensibilidad, sin necesidad de optimización

El kit QIAGEN Multiplex PCR Plus superó a los kits probados de otros proveedores y ofrece alta especificidad y sensibilidad en aplicaciones de PCR multiplex, eliminando la necesidad de optimizar los parámetros de PCR (véanse las figuras «PCR de 19 plex eficiente» y «PCR de 16 plex exitosa con una amplia gama de cantidades de plantilla»). La PCR subóptima se puede mejorar con Q-Solution, un aditivo para la amplificación de plantillas ricas en GC, también incluido en el kit.

Los resultados confiables generan ahorros de tiempo y costos para aplicaciones avanzadas

El kit QIAGEN Multiplex PCR Plus se puede utilizar con éxito en una amplia variedad de aplicaciones avanzadas (véase la tabla). La sencilla configuración de la reacción, el procedimiento rápido y la facilidad de uso que ofrece el kit garantizan resultados reproducibles con mayor rapidez, sin necesidad de optimizar los parámetros de PCR. El desarrollo de ensayos multiplex es sencillo y directo, lo que garantiza un ahorro significativo de tiempo y costes en la investigación rutinaria.

Especificaciones de la ADN polimerasa HotStarTaq Plus

Principio

Componente del kit: Ventajas
ADN polimerasa HotStarTaq Plus: amplificación altamente específica y sensible. Configuración a temperatura ambiente. Tiempo de activación de 5 minutos.
Buffer PCR Multiplex Plus con Factor MP: Amplificación de todos los objetivos en paralelo No se necesita optimización de los parámetros de PCR Un único protocolo para todos los ensayos multiplex Procedimiento rápido
CoralLoad Dye: Fácil visualización durante el pipeteo Carga de gel inmediata Visualización de la migración del ADN
Solución Q: Amplificación de objetivos difíciles

El kit PCR Multiplex Plus de QIAGEN se basa en la tecnología de PCR multiplex patentada de QIAGEN y se presenta en una mezcla maestra fácil de usar. Todos los componentes del kit están especialmente desarrollados para garantizar la máxima facilidad de uso y rapidez, ofreciendo resultados consistentemente fiables (véase la tabla). La mezcla maestra PCR Multiplex contiene concentraciones preoptimizadas de ADN polimerasa HotStarTaq Plus y MgCl₂, así como dNTP y un innovador tampón de PCR.

Factores críticos para una PCR multiplex exitosa: resultados consistentes y confiables para diversas aplicaciones

La PCR multiplex ahorra tiempo y reactivos a los investigadores que realizan un gran número de reacciones de PCR y se utiliza ampliamente en genotipado y análisis de ADN o ADNc en laboratorios de investigación, forenses y moleculares. Sus aplicaciones incluyen la tipificación y el análisis de organismos transgénicos y patógenos, la amplificación y el análisis de microsatélites, la detección de regiones para SNP o mutaciones, así como estudios metagenómicos. Sin embargo, la PCR multiplex es una técnica muy exigente. La optimización de la PCR es el principal factor que influye en el éxito o el fracaso de la PCR multiplex. La variación en la cinética de hibridación de los diferentes pares de cebadores en la PCR multiplex puede generar problemas como el sesgo de amplificación. Los cebadores que se unen con alta eficiencia utilizan más componentes de la reacción de amplificación, lo que reduce el rendimiento de otros productos de PCR. Debido al mayor número de cebadores, también existe un mayor riesgo de formación de dímeros de cebadores y cebado inespecífico. No abordar estos desafíos conduce a una baja sensibilidad, una amplificación inespecífica y una amplificación sesgada de dianas seleccionadas, lo que resulta en resultados inconsistentes e insatisfactorios. Superar estos obstáculos requiere pasos de optimización tediosos y laboriosos, lo que resulta en un aumento de los costos. El kit Multiplex PCR Plus de QIAGEN elimina estos desafíos y funciona fácilmente a la primera. La composición única de la mezcla maestra Multiplex PCR garantiza una amplificación altamente específica y sensible, incluso de dianas difíciles de amplificar. El kit permite el establecimiento rápido y exitoso de todos los ensayos de PCR multiplex, ahorrando significativamente tiempo y costos (véase la figura "PCR multiplex exitosa sin necesidad de optimización").

ADN polimerasa HotStarTaq Plus

La ADN polimerasa HotStarTaq Plus es una forma modificada de la ADN polimerasa Taq y no presenta actividad polimerasa a temperatura ambiente. Esto evita la extensión de los cebadores annealed inespecíficamente y los dímeros de cebadores formados a bajas temperaturas durante la configuración de la PCR y el ciclo inicial. No se requiere optimizar las condiciones de reacción. Los ensayos multiplex también se pueden configurar fácilmente a temperatura ambiente. La ADN polimerasa HotStarTaq se activa mediante una incubación de 5 minutos a 95 °C, que puede incorporarse a cualquier programa de termociclador.

Tampón de PCR multiplex

Este tampón especial contiene una combinación optimizada de K+ y NH4+, así como el exclusivo aditivo de PCR, Factor MP, que aumenta la concentración local de cebadores en la plantilla (véase la figura "Annealing estable y eficiente"). El annealing inespecífico se minimiza y la amplificación paralela de todos los objetivos es exitosa, incluso con cantidades muy bajas de plantilla (véase la figura "PCR de 16 plex exitosa en un amplio rango de cantidades de plantilla"). Junto con K+ y otros cationes, Factor MP estabiliza los cebadores específicamente unidos, lo que permite una extensión eficiente de cebadores mediante la ADN polimerasa HotStarTaq Plus. Este innovador tampón mantiene la amplificación específica en cada ciclo de PCR al promover una alta proporción de unión de cebadores específicos a inespecíficos durante el paso de annealing en cada ciclo de PCR. Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH4)2SO4, el tampón proporciona condiciones rigurosas de annealing de cebadores en un rango más amplio de temperaturas de annealing y concentraciones de Mg2+ que los tampones de PCR convencionales. Por lo tanto, la optimización de la PCR mediante la variación de la temperatura de annealing o la concentración de Mg 2+ suele ser mínima o no es necesaria.

El kit también incluye Q-Solution, un aditivo único que promueve la amplificación de dianas difíciles de amplificar, como regiones ricas en GC o plantillas con una estructura secundaria compleja. El colorante CoralLoad, altamente versátil y también incluido en el kit, facilita aún más su manejo al mejorar la visibilidad del pipeteo, la carga posterior del gel y la visualización de la migración del ADN (véase la figura "Configuración sencilla de PCR y visualización práctica del ADN").

Procedimiento

A diferencia de los métodos alternativos, que fallan incluso después de una optimización prolongada, el kit QIAGEN Multiplex PCR Plus permite el éxito en la PCR multiplex en el primer intento utilizando un solo protocolo (ver la figura "PCR multiplex exitosa sin necesidad de optimización").

Análisis posterior sencillo y rápido

El análisis posterior de los productos de PCR multiplex obtenidos con el kit QIAGEN Multiplex PCR Plus es sencillo y rápido mediante diversos métodos. Tanto si se realiza el análisis con geles de agarosa, secuenciadores capilares o el sistema QIAxcel Advanced, todos los amplicones se pueden visualizar fácilmente y los fragmentos individuales se pueden distinguir con fiabilidad (véase la figura "PCR eficiente de 19 plexos").

Formato de kit conveniente

El kit QIAGEN Multiplex PCR Plus proporciona una mezcla maestra preoptimizada y lista para usar para mayor comodidad. El uso de una mezcla maestra ahorra tiempo, simplifica la manipulación para la preparación de la reacción y aumenta la reproducibilidad al eliminar muchas posibles fuentes de errores de pipeteo y contaminación: se minimizan los pasos de pipeteo y se eliminan los cálculos tediosos. Solo es necesario añadir los cebadores y la plantilla para preparar la mezcla de amplificación final. La mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C, lo que permite una preparación aún más rápida de los ensayos de PCR multiplex. Las reacciones se pueden preparar a temperatura ambiente, lo que garantiza una mayor comodidad y facilidad de uso. La ADN polimerasa HotStarTaq Plus se activa mediante un paso de incubación de 5 minutos a 95 °C, que se puede incorporar fácilmente a los programas de termociclado existentes. El colorante CoralLoad incluido en el kit garantiza una mayor comodidad al mejorar la visibilidad del pipeteo durante la preparación de la PCR y la visualización de la migración del ADN en un gel.

Protocolo complementario para la preamplificación de hasta 80 dianas