Qiagen, 206246, Kit de PCR de microsatélites Type-it (2000)

Para reacciones de 2000 x 25 µl: 2x Multiplex PCR Master Mix (1 x 25 ml), 5x Q-Solution (1 x 10 ml), agua sin ARNasa (1 x 20 ml)

Características

- Análisis fiable de microsatélites mediante PCR multiplex
- Desarrollo de ensayos de microsatélites sin optimización
- Coamplificación exitosa y específica de todos los fragmentos
- Protocolo optimizado para resultados rápidos y confiables
- Instrucciones sencillas de uso con varias plataformas de análisis posteriores

Principio

El kit de PCR de microsatélites Type-it proporciona un análisis de genotipado rápido y fiable de humanos, animales, plantas y bacterias mediante microsatélites, marcadores STR o VNTR, sin necesidad de largos procedimientos de optimización. El kit se basa en la tecnología multiplex patentada de QIAGEN e incluye la ADN polimerasa HotStarTaq Plus de alta especificidad, una enzima de inicio en caliente modificada químicamente y un sistema de tampón multiplex especialmente desarrollado que incluye el factor MP. Juntos, estos componentes garantizan altos rendimientos y permiten una amplificación multiplex fiable de todos los loci de microsatélites de interés. El kit incluye protocolos específicos para la amplificación de microsatélites o STR, así como consejos paso a paso sobre la cantidad de plantilla, el número de ciclos, las condiciones de PCR y los detalles del instrumento para diferentes plataformas de análisis posteriores, como geles de agarosa, secuenciadores capilares, el bioanalizador Agilent y el sistema QIAxcel Advanced.

Tampón de PCR de microsatélites Type-it

El exclusivo tampón de PCR de microsatélites Type-it facilita la amplificación de múltiples productos de PCR. A diferencia de los reactivos de PCR convencionales, el tampón de PCR de microsatélites Type-it contiene una combinación equilibrada y especialmente desarrollada de sales y aditivos para garantizar eficiencias comparables en la hibridación y extensión de todos los cebadores de la reacción. Gracias a una combinación excepcionalmente equilibrada de KCl y (NH₄)₂SO₄, este tampón de PCR proporciona condiciones rigurosas de hibridación de cebadores en un rango más amplio de temperaturas y concentraciones de Mg₂+ que los tampones de PCR convencionales. La necesidad de optimizar la PCR variando la temperatura de hibridación o la concentración de Mg₂+ se reduce drásticamente, o a menudo no es necesaria. Los procedimientos de optimización habituales para PCR multiplex prácticamente se eliminan. El tampón también contiene el factor sintético MP (véase la figura "Hibridación estable y eficiente"), que permite una hibridación y extensión de cebadores eficientes, independientemente de la secuencia de cebadores. El factor MP aumenta la concentración local de cebadores en el molde de ADN y estabiliza los cebadores unidos específicamente.

Solución Q

El kit de PCR de microsatélites Type-it incluye Q-Solution. Este innovador aditivo para PCR facilita la amplificación de moldes complejos modificando el comportamiento de fusión del ADN. El uso de este reactivo único suele facilitar o mejorar la PCR subóptima. A diferencia del DMSO y otros aditivos para PCR, Q-Solution se utiliza a una concentración de trabajo definida con cualquier sistema de cebador-molde y no es tóxico.

Procedimiento

El kit de PCR de microsatélites Type-it incluye protocolos específicos para cada aplicación, optimizados para el análisis de microsatélites en secuenciadores capilares de alta resolución. Esto garantiza resultados fiables tanto para análisis rutinarios como para el desarrollo de nuevos ensayos. Las reacciones se pueden configurar a temperatura ambiente, lo que garantiza una mayor comodidad y facilidad de uso.

Una forma rápida y sencilla de obtener resultados de genotipado fiables

El kit de PCR de microsatélites Type-it permite desarrollar ensayos multiplex de forma rápida y sencilla para obtener resultados de genotipado precisos y reproducibles. Sea cual sea la aplicación (análisis de microsatélites, STR, SSR o VNTR), simplemente añada la plantilla y los cebadores e inicie el programa del termociclador según el protocolo optimizado. La mezcla de reacción contiene todos los reactivos necesarios para la PCR multiplex específica de microsatélites y permite obtener resultados precisos sin necesidad de largos procedimientos de optimización, en comparación con los métodos actuales (véase la figura "Análisis de genotipado exitoso basado en PCR multiplex").

Optimizado para su uso con secuenciadores capilares

El análisis de microsatélites en sistemas de detección de alta resolución, como los secuenciadores capilares, suele presentar el problema de un rendimiento de producto desigual y grandes diferencias de intensidad en las señales fluorescentes. El kit de PCR de microsatélites Type-it supera esta limitación y garantiza un alto rendimiento de producto para todos los amplicones en un experimento multiplex. El kit incluye protocolos optimizados para su uso con cebadores fluorescentes y supera a las soluciones enzimáticas de otros proveedores (véase la figura "Análisis fiable de STR de 13 plexos sin necesidad de optimización").

Aplicaciones

- Identificación de especies o individuos
- Análisis de la relación
- Inestabilidad de microsatélites
- Genética de poblaciones

El kit de PCR de microsatélites Type-it se utiliza para analizar microsatélites, STR (repeticiones cortas en tándem), SSR (repeticiones de secuencia simple) y VNTR (número variable de repeticiones en tándem) y se puede utilizar en diversos campos de investigación como: