Qiagen, 206744, Kit de PCR multiplex UCP (500) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

Para reacciones de PCR de 500 x 20 µl: 5 x 500 µl de mezcla maestra de PCR multiplex UCP (4x), 2 x 200 µl de trazador de plantilla UCP (25x), 1 x 50 µl de trazador de mezcla maestra UCP (125x), 5 x 1,9 ml de agua UCP

Características

- Ácido nucleico agotado: evita el fondo del ADN residual
- La robustez frente a los inhibidores y en un amplio rango de GC garantiza una elaboración de perfiles fiable.
- Multiplexación sensible adecuada para análisis genéticos y de microbioma/metagenoma
- El control visual del pipeteo y los colorantes de seguimiento del gel monitorean el éxito del procedimiento
- La configuración de la reacción a temperatura ambiente permite procedimientos automatizados
- La química de inicio en caliente protegida proporciona especificidad y sensibilidad superiores

Detalles del producto

El kit de PCR multiplex UCP proporciona una plataforma conveniente para PCR de inicio en caliente multiplex altamente sensible y específica utilizando cualquier plantilla de ADN o ADNc.

Se implementan procesos específicos para permitir la producción ultralimpia de esta mezcla maestra, minimizando el potencial ADN de fondo. Esto, combinado con una resistencia superior a los inhibidores y un sesgo de cromatografía de gases minimizado, convierte al kit en la opción ideal para aplicaciones en el microbioma, como la amplificación de 16S o 18S. Otras características incluyen: controles visuales de pipeteo, un protocolo de ciclado rápido, estabilidad a temperatura ambiente durante y después de la configuración de la reacción, y un formato de mezcla maestra 4x concentrado, que permite mayores volúmenes de entrada de muestra.

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Actuación

Los procesos de producción ultralimpios, combinados con la eliminación de ácidos nucleicos, minimizan la posible contaminación con ADN residual de los hospedadores de expresión u otras fuentes. Todos los componentes se analizan para detectar ADN bacteriano y fúngico mediante ensayos de PCR genéricos para las secuencias codificantes de ARNr 16S y 18S. Esto facilita la obtención de resultados precisos en pruebas microbianas, procedimientos de control de calidad o análisis y secuenciación de microbiomas/metagenomas. En particular, el análisis de muestras con baja biomasa se beneficiará de los reactivos ultralimpios, pero también la mejora de la resistencia a los inhibidores y el mínimo sesgo por contenido de cromatografía de gases (GC) garantizan resultados precisos de diversidad alfa o beta. El alto grado de multiplexación, la capacidad de lectura larga, el pipeteo visual integrado y los colorantes de carga de gel mejoran aún más la eficiencia en los flujos de trabajo de genotipado y pruebas genéticas.

Principio

El kit UCP Multiplex PCR proporciona una práctica formulación de mezcla maestra lista para usar y agua para PCR UCP. También contiene trazador naranja de mezcla maestra UCP y trazador azul de plantilla UCP en viales separados para uso opcional (véase la figura ''Kit UCP Multiplex PCR''). La mezcla maestra incluye una combinación equilibrada de iones K+ y NH₄, así como el exclusivo factor sintético MP, que juntos promueven la hibridación estable y eficiente de los cebadores con la plantilla de ácido nucleico, lo que permite una alta eficiencia de PCR para todas las dianas (véase la figura "Tampón PCR único"). La separación exitosa de 20 dianas o más se puede lograr mediante electroforesis capilar o en gel tradicional, mientras que las estrategias de detección basadas en secuenciación permiten niveles de multiplexación significativamente mayores. A bajas temperaturas, la ADN polimerasa se mantiene inactiva mediante un anticuerpo y un novedoso aditivo Guard, que estabiliza el complejo (véase la figura ''Principio del mecanismo de arranque en caliente protegido por Guard''). Esto mejora la rigurosidad del inicio en caliente y previene cualquier actividad enzimática a temperatura ambiente, permitiendo la configuración de la reacción sin hielo o en instrumentos. La enzima se activa completamente después del paso de incubación de 2 minutos a 95 °C y comienza a amplificar con alta especificidad desde el primer ciclo. El procedimiento de inicio en caliente previene la extensión de cebadores y dímeros de cebadores no específicamente annealed en el primer ciclo asegurando PCR altamente específica y reproducible. Los colorantes azul y naranja en el trazador de plantilla UCP y en el trazador de mezcla maestra UCP, respectivamente, permiten el seguimiento visual de las muestras pipeteadas durante la configuración de la PCR, para prevenir errores. Cuando se agrega la plantilla azul a la mezcla maestra de PCR naranja, el color cambia a verde, confirmando que se agregó la muestra. (ver figura ''Control visual del pipeteo'' ). El uso de estos trazadores es opcional. Las reacciones se pueden cargar directamente en geles de agarosa después del ciclado. Cada colorante trazador permite monitorear el proceso de carga y el seguimiento eficiente de la electroforesis posterior.

Procedimiento

El kit UCP Multiplex proporciona una práctica fórmula de mezcla maestra concentrada 4x, lista para usar, que permite un volumen de entrada de plantilla alto para aumentar aún más la sensibilidad.

Aplicaciones

El kit UCP Multiplex PCR es ideal para procedimientos que requieren alta pureza y precisión, como pruebas microbianas, análisis y secuenciación de microbioma/metagenoma, control de calidad, genotipado y flujos de trabajo de pruebas genéticas.