Qiagen, 207045, Kit de transcriptoma completo QuantiTect (100)

Para 100 reacciones de 50 µl: 100 µl de enzima T-Script, 400 µl de tampón T-Script, 100 µl de enzima de ligación 1, 100 µl de enzima de ligación 2, 200 µl de reactivo de ligación, 600 µl de tampón de ligación, 100 µl de ADN polimerasa REPLI-g Midi, 2 x 1,45 ml de tampón de reacción REPLI-g Midi

Características

- Altos rendimientos de ADNc para análisis y archivo de qPCR ilimitados
- Amplificación igual de todo el ADNc y todas las regiones de transcripción
- Protocolo rápido y sencillo con reactivos optimizados

Detalles del producto

El kit QuantiTect para el transcriptoma completo permite la preamplificación y la transcripción inversa de cantidades limitadas de ARN a altos rendimientos de ADNc para el análisis ilimitado de la expresión génica mediante PCR en tiempo real. Un protocolo optimizado garantiza un procedimiento rápido y sencillo. El kit consta de un conjunto completo de enzimas y tampones para la amplificación del transcriptoma completo (ATC). La innovadora modificación de la tecnología de la polimerasa Phi 29 permite obtener rendimientos de hasta 40 μg de ADNc a partir de tan solo 1 ng de ARN. La excepcionalmente alta procesividad de esta polimerasa garantiza la generación de ADNc con dianas amplificadas uniformemente para asegurar un análisis fiable de la expresión génica mediante PCR en tiempo real.

Actuación

Material de partida: Tiempo de amplificación
10 ng de ARN: 2 horas
10 ng de ARN: 8 horas

El kit QuantiTect Whole Transcriptome proporciona una amplificación altamente uniforme de todos los transcritos, esencial para un análisis fiable de la expresión génica. Todos los transcritos de ARNm se amplifican con igual representación en las regiones 5' y 3' (véase la figura "Amplificación igual en las regiones 5' y 3'"). La preservación del perfil de transcripción se muestra en la figura "Preservación del perfil de transcripción", donde se compara el ADNc amplificado con WTA, preparado con el kit QuantiTect Whole Transcriptome, con el ADNc no amplificado, preparado con una transcriptasa inversa.

Se pueden lograr rendimientos de ADNc altos y reproducibles de hasta 40 μg (véase la figura "Rendimientos de ADNc reproducibles"). Esto permite un análisis de PCR en tiempo real ilimitado con valores de CT altamente reproducibles (véase la tabla y la figura "Análisis de PCR en tiempo real fiable"). Además, dado que el ADNc es más estable que el ARN, puede archivarse de forma segura para estudios futuros.

Principio

La obtención de perfiles de expresión génica puede verse limitada por la pequeña cantidad de muestra biológica disponible. Con el kit QuantiTect para el transcriptoma completo, es posible realizar análisis ilimitados por PCR en tiempo real de muestras pequeñas y valiosas. El kit QuantiTect para el transcriptoma completo está optimizado para la amplificación del transcriptoma completo a partir de tan solo 1 ng de ARN, o ARN equivalente a aproximadamente 50 células. Se pueden utilizar cantidades incluso menores de ARN, dependiendo de la calidad del ARN y la abundancia del transcrito de interés.

El kit QuantiTect para transcriptoma completo contiene transcriptasa inversa, ADN polimerasa y tampones y reactivos optimizados para la amplificación de todos los transcritos de una muestra de ARN. El kit integra la síntesis de ADNc con la calidad probada de la tecnología REPLI-g para una amplificación de secuencias sin sesgo. La amplificación REPLI-g utiliza la tecnología de Amplificación por Desplazamiento Múltiple (MDA), que realiza una amplificación de secuencias isotérmica mediante una ADN polimerasa procesiva única (véase la figura "Amplificación del transcriptoma completo"). Esta tecnología garantiza la amplificación sin sesgo de todas las regiones de transcripción, incluso de los extremos 5', lo que proporciona una cantidad ilimitada de ADNc, ideal para la PCR en tiempo real.

Aplicaciones

El ADNc preparado con el kit QuantiTect Whole Transcriptome está diseñado para su uso en análisis de PCR en tiempo real con los kits QuantiFast o Rotor-Gene y puede archivarse para análisis futuros. El ADNc no es apto para análisis de microarrays. Para la amplificación del genoma completo a partir de muestras pequeñas o valiosas, QIAGEN ofrece los kits REPLI-g y el servicio REPLI-g. La amplificación es altamente uniforme con un sesgo de secuencia mínimo, lo que proporciona ADN adecuado para aplicaciones como la genotipificación y la hibridación genómica comparativa (CGH).