Qiagen, 208014, Kit de PCR UCP SYBR Green (500)

5 x 1 ml UCP SYBR Green PCR MasterMix (2x); 1 x 200 µl UCP Yellow Template Dilution Buffer; 2 x 250 µl UCP ROX Dye; 4 x 1,9 ml UCP PCR Water

Características

- Los reactivos empobrecidos en ácido nucleico evitan el fondo del ADN residual.
- El control visual del pipeteo evita errores en el pipeteo
- Excepcional robustez del inhibidor para obtener resultados confiables a partir de todos los materiales de partida comunes
- Conveniente y automatizable debido a la configuración de la reacción a temperatura ambiente
- Mecanismo de inicio en caliente mediado por anticuerpos y protegido por protección para una especificidad superior

Detalles del producto

El kit de PCR UCP SYBR Green ofrece un formato de mezcla maestra práctico y ultralimpio para una PCR en tiempo real altamente sensible y específica utilizando cualquier plantilla de ADN o ADNc. Se implementan procesos específicos para permitir una producción ultralimpia de la mezcla maestra, lo que minimiza el fondo de ADN contaminante. La mezcla maestra también incluye un rastreador de color integrado para identificar el pipeteo correcto. Su excelente resistencia a los inhibidores y la opción de cuantificación hacen del kit de PCR UCP SYBR Green la opción ideal para aplicaciones microbianas sin contaminación, como el análisis de secuenciación 16S (bacterias) o 18S (hongos). El kit también es muy recomendable para aplicaciones de control de calidad.

Combinando un rendimiento superior con la Producción Ultra Limpia, el Kit de PCR con Sonda UCP es una solución única para la PCR en tiempo real basada en sonda, libre de ADN residual. La mezcla maestra de Producción Ultra Limpia es especialmente adecuada para aplicaciones que requieren reactivos sin ácidos nucleicos contaminantes, como el control de calidad o el análisis del microbioma. Otras características incluyen un mecanismo único de arranque en caliente mediado por anticuerpos, un indicador visual para el control del pipeteo, una configuración de reacción a temperatura ambiente y una alta resistencia a los inhibidores.

Actuación

Los reactivos ultrapuros de los kits de PCR UCP, con bajo contenido de ácidos nucleicos, son ideales para procesos propensos a contaminar el ADN de fondo. Nuestros procesos de producción ultralimpios minimizan la posible contaminación con ADN residual del huésped de expresión u otras fuentes. Todos los componentes del kit se someten a rigurosas pruebas de ADN bacteriano y fúngico mediante ensayos de PCR genéricos para secuencias codificantes de ARNr 16S y 18S. Estos kits son muy recomendables para aplicaciones que requieren reactivos ultrapuros, como análisis microbianos, procedimientos de control de calidad, análisis y secuenciación de microbiomas/metagenomas, y análisis de muestras de baja biomasa.

Los kits también permiten la cuantificación en un amplio rango lineal, hasta dos equivalentes de genoma bacteriano de E. coli (16S) o cinco equivalentes de genoma de C. albicans (18S), gracias a la formulación optimizada de la mezcla maestra. Otras ventajas de los kits de PCR UCP son su robustez superior frente a inhibidores o variaciones en el contenido de cromatografía de gases (GC), pipeteo visual integrado, configuración a temperatura ambiente y ciclado ultrarrápido, todo lo cual mejora la eficiencia de sus flujos de trabajo microbianos.

Principio

Los kits de PCR UCP ofrecen alta especificidad mediante un eficiente mecanismo de arranque en caliente. A bajas temperaturas, la ADN polimerasa se mantiene inactiva gracias a un anticuerpo y un novedoso aditivo Guard que estabiliza el complejo (véase la figura "Principio del mecanismo de arranque en caliente con protección Guard"). Este riguroso mecanismo de arranque en caliente impide cualquier actividad enzimática a temperatura ambiente, lo que permite la preparación de la reacción sin hielo ni instrumental. La enzima se activa completamente tras un paso de incubación de 2 minutos a 95 °C y comienza a amplificar con alta especificidad desde el primer ciclo. El procedimiento de arranque en caliente también impide la extensión de cebadores y dímeros de cebadores no específicamente annealed en el primer ciclo, lo que garantiza una PCR altamente específica y reproducible.

Se utilizan dos colorantes inertes integrados para proporcionar un control visual del pipeteo. La mezcla maestra UCP contiene un colorante azul inerte y el tampón de dilución de plantilla UCP amarillo contiene un colorante amarillo inerte. Al añadir el ácido nucleico plantilla, diluido con el tampón de dilución de plantilla UCP amarillo, a la mezcla maestra, el color de la solución cambia de azul a verde, lo que indica visualmente que el pipeteo y la configuración de la reacción son correctos (véase la figura "Control de pipeteo integrado").

Procedimiento

Los kits de PCR UCP contienen una mezcla maestra 2x concentrada lista para usar, agua PCR UCP y colorante UCP ROX para uso opcional. Los protocolos de ciclado ultrarrápido de dos pasos entregan los resultados en menos de una hora. El kit se puede usar en cualquier termociclador en tiempo real. UCP ROX se suministra en un tubo aparte y se puede añadir si se utiliza un termociclador que requiere ROX como colorante de referencia pasivo. El kit ofrece resultados altamente consistentes con diferentes termocicladores en términos de sensibilidad, reproducibilidad y eficiencia, a pesar de las diferentes capacidades de ciclado rápido.

Para agilizar aún más los flujos de trabajo de PCR, recomendamos el instrumento QIAgility para la configuración automatizada de reacciones.

Aplicaciones

Los kits de PCR UCP son ideales para procedimientos que exigen alta pureza y precisión, como análisis microbianos, flujos de trabajo de microbioma/metagenoma, control de calidad y otros análisis cuantitativos de ácidos nucleicos. El kit ofrece una alta eficiencia, especialmente en flujos de trabajo de análisis microbiano, como la cuantificación de ADN microbiano frente a ADN del huésped, antes de la preparación de bibliotecas NGS a partir de hisopos o fluidos corporales. También es muy recomendable para la detección y cuantificación de ADN contaminante o residual, como ADN bacteriano, fúngico o de cualquier huésped, en procedimientos de control de calidad o procesos de producción biológica. El kit puede utilizarse en cualquier termociclador en tiempo real común.

Para el análisis del microbioma, QIAGEN ofrece una gama de productos especializados que incluyen los kits DNeasy Power Soil Pro para extracción de muestras, los kits UCP Multiplex y HiFidelity para PCR de punto final, los paneles QIAseq 16S/ITS para secuenciación de próxima generación y el software CLC Microbial Genomics Pro Suite para análisis bioinformático.