Qiagen, 208254, Kit de PCR de sonda QuantiNova (500) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

Para reacciones de 500 x 20 µl: 3 x 1,7 ml 2x QuantiNova Probe PCR Master Mix, 1 ml de colorante de referencia QN ROX, 500 µl de tampón de dilución de plantilla amarillo QuantiNova, 1,9 ml de agua

Características

- Configuración de reacción precisa con un indicador visual incorporado
- Detección precisa y robusta de objetivos hasta una copia
- Especificidad inigualable gracias al novedoso mecanismo de arranque en caliente
- Detección sensible de hasta 5 objetivos en 1 tubo
- Estabilidad de reacción de hasta 100 horas a 30 °C para flujos de trabajo flexibles

Detalles del producto

Con mayor especificidad, sensibilidad, velocidad y seguridad de proceso, el kit de PCR QuantiNova SYBR Green (kit SYBR qPCR) establece nuevos estándares en la qPCR basada en SYBR Green. Un novedoso mecanismo de arranque en caliente aumenta significativamente la especificidad de la PCR en tiempo real y la química optimizada produce resultados cuantitativos precisos a partir de ADNc o ADNg en cualquier termociclador de PCR en tiempo real, detectando incluso una sola copia diana. Finalmente, un indicador visual integrado garantiza un pipeteo correcto.

Evite los efectos perjudiciales de un cebado incorrecto a bajas temperaturas con el kit de PCR con sonda QuantiNova (kit de qPCR con sonda). Basado en un novedoso mecanismo de inicio en caliente mediado por anticuerpos, este kit mejora la especificidad y la eficiencia de la PCR en tiempo real con sonda para proporcionar un análisis preciso, simple o dúplex, de ADNc o ADNg en diversos cicladores de PCR en tiempo real. La comodidad adicional de su estabilidad extrema de hasta 100 horas a temperatura ambiente, sin necesidad de refrigerante, lo hace ideal para la manipulación de muestras de alto rendimiento y flujos de trabajo automatizados. Un sistema de seguimiento integrado para la identificación visual del pipeteo correcto le ofrece total tranquilidad, mientras que la detección extremadamente sensible, incluso de cantidades diana bajas, garantiza resultados de qPCR fiables en todo momento.

Los kits de PCR multiplex QuantiNova (kits de qPCR multiplex) permiten la cuantificación rápida y fiable de hasta 5 dianas de ADNc o ADNg en un solo tubo mediante PCR multiplex, en tiempo real o RT-PCR de dos pasos. La tecnología Q-bond y una mezcla maestra optimizada facilitan una PCR multiplex ultrarrápida en tiempo real en tan solo una hora. La combinación de un sistema único de inicio en caliente y un tampón de PCR en la mezcla maestra 4x lista para usar garantiza una qPCR de alta sensibilidad en cualquier termociclador en tiempo real sin necesidad de optimización, ofreciendo además opciones de configuración de reacción automatizada a temperatura ambiente. Un sistema de seguimiento integrado para la identificación visual del pipeteo correcto ayuda a prevenir errores humanos, y la combinación con el kit de transcripción inversa QuantiNova para la síntesis de ADNc permite la inclusión del ARN de control interno QuantiNova para supervisar el éxito de la transcripción inversa y la qPCR.

Actuación

Valores medios de TC
Kit de PCR de sonda QuantiNova: Kit de PCR de sonda del proveedor L
Cantidad en ng: 0 h
10:24.37
1: 27.78
0.1: 31.16
Sin control de plantilla: No detectado

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Indicador visual incorporado para una configuración de reacción precisa

La mezcla maestra suministrada con los kits de PCR QuantiNova contiene un colorante azul inerte que no interfiere con la PCR en tiempo real, sino que aumenta la visibilidad en el tubo o pocillo. El tampón de dilución de plantilla amarillo QuantiNova contiene un colorante amarillo inerte. Al diluir el ácido nucleico plantilla en el tampón de dilución de plantilla amarillo QuantiNova y añadirlo a la mezcla maestra, el color de la solución cambia de azul a verde (véase la figura "Configuración precisa de la reacción indicada por el control de pipeteo integrado"), lo que indica visualmente que cada reacción se configuró correctamente.

Kit de PCR QuantiNova SYBR Green

La alta sensibilidad del kit de PCR QuantiNova SYBR Green permite una detección precisa y robusta incluso de una sola copia diana (véase la figura «Detección robusta y sensible de dianas de una sola copia»). Esta extrema sensibilidad se consigue incluso en condiciones de ciclos ultrarrápidos.

El kit de PCR QuantiNova SYBR Green puede utilizarse con una amplia gama de cantidades de plantilla. El rendimiento de este kit de PCR en tiempo real SYBR se ha probado en un rango dinámico de 8 órdenes de magnitud (de 100 ng a 10 fg de ADNc) e, independientemente del instrumento utilizado, la cuantificación fue precisa y robusta (véase la figura «Cuantificación precisa en un amplio rango dinámico»).

La rigurosa especificidad y la excepcional sensibilidad de la química QuantiNova producen resultados óptimos en el QIAGEN Rotor-Gene Q, pero se puede utilizar en cualquier termociclador de PCR en tiempo real, independientemente del formato, la capacidad de ciclado rápido y la necesidad de un colorante de referencia pasivo. El ROX incluido en el kit QuantiNova SYBR Green PCR se añade fácilmente a la mezcla maestra si es necesario. Los resultados de amplificación y cuantificación con Rotor-Gene Q, Agilent Technologies Mx3005P, Applied Biosystems 7900 HT Fast, ViiA 7, StepOnePlus y 7500 Fast, Roche LightCycler 480 y Bio-Rad CFX96 son invariablemente robustos y sensibles. El kit QuantiNova SYBR Green PCR ofrece resultados superiores a los de otros kits SYBR Green PCR. Independientemente de las condiciones de ciclado o del instrumento, la química QuantiNova genera valores de CT más bajos, mayor reproducibilidad y mayor eficiencia de reacción.

El tampón de dilución QuantiNova Yellow Template proporciona tranquilidad durante la preparación de la reacción, pero no es necesario para obtener resultados superiores con el kit de PCR QuantiNova SYBR Green. La química de QuantiNova está diseñada para ser flexible, por lo que puede integrarse en cualquier flujo de trabajo establecido. Por lo tanto, el rendimiento es óptimo con el objetivo de amplificación de interés, el instrumento y el tampón de dilución de su elección.

Kit de PCR de sonda QuantiNova

La mezcla de PCR en tiempo real de este kit de PCR en tiempo real con sonda se puede almacenar a 30 °C hasta 100 horas sin afectar el rendimiento de las reacciones posteriores. Su excelente estabilidad, incluso tras un almacenamiento prolongado a temperatura ambiente sin refrigerante, hace que el kit de PCR con sonda QuantiNova sea ideal para la preparación de reacciones de alto rendimiento y la manipulación de pilas de placas (véase la tabla "Efecto del almacenamiento en la estabilidad de la reacción").

Comparación de los valores de CT antes y después de 100 horas de almacenamiento a 30 °C. Las PCR en tiempo real, que incluían la mezcla maestra, el ADNc molde, los cebadores y las sondas para TNF, se incubaron a 30 °C durante 100 horas y se procesaron en la PCR en tiempo real junto con reacciones recién preparadas. Se analizaron reacciones por triplicado con tres cantidades diferentes de molde. A diferencia del kit de PCR con sonda del proveedor L, los valores de CT proporcionados por el kit de PCR con sonda QuantiNova no variaron tras un almacenamiento prolongado de las muestras a 30 °C.

La alta sensibilidad del kit QuantiNova Probe PCR resulta en una detección precisa y robusta incluso de una sola copia diana (ver figura “Detección sensible y robusta de una sola copia diana”). La mezcla maestra especial suministrada con estos kits permite la cuantificación precisa de 2 dianas con abundancias muy diferentes en un solo tubo. Esto ahorra tiempo, dinero y reduce la cantidad de material de muestra necesario. Además, los datos de PCR dúplex obtenidos son comparables a los obtenidos de una PCR simple. La combinación única de la tecnología de tampón patentada y bien probada de QIAGEN junto con la nueva ADN polimerasa QuantiNova, el anticuerpo QuantiNova y QuantiNova Guard, garantiza el éxito de la PCR en tiempo real en el primer intento, sin la necesidad de una optimización costosa y que requiere mucho tiempo, incluso con ensayos de PCR en tiempo real desafiantes (ver figura “Resultados superiores con ensayos desafiantes”).

El kit de PCR QuantiNova Probe se puede utilizar en cualquier termociclador en tiempo real. ROX se suministra en un tubo aparte y se puede añadir si se utiliza un termociclador que lo utiliza como colorante de referencia pasivo. El kit ofrece resultados muy consistentes entre diferentes termocicladores en cuanto a sensibilidad, reproducibilidad y eficiencia. La consistencia de los resultados se mantiene a pesar de las diferentes capacidades de ciclado rápido de los distintos termocicladores, lo que resulta en diferentes protocolos de ciclado.

Kits de PCR multiplex QuantiNova

La mezcla maestra especial que se incluye con los kits QuantiNova Multiplex PCR permite configurar rápidamente las reacciones multiplex y obtener resultados satisfactorios a la primera, proporcionando datos de PCR multiplex comparables a los de PCR singleplex. La mezcla maestra 4x, altamente concentrada, admite hasta 800 ng de plantilla, lo que garantiza una sensibilidad excepcional, incluso en reacciones de hasta 5plex. El kit puede distinguir claramente pequeñas diferencias en la cantidad de plantilla y proporciona una cuantificación precisa de dianas con abundancias muy variables.

Un novedoso mecanismo de inicio en caliente mediado por anticuerpos garantiza una especificidad excepcional y permite la configuración de la reacción a temperatura ambiente, ideal para procedimientos automatizados. El tampón de PCR rápida, especialmente desarrollado, contiene el aditivo Q-Bond, que reduce significativamente los tiempos de hibridación y extensión, permitiendo una qPCR multiplex en menos de una hora. El control visual del pipeteo ayuda a prevenir errores humanos y aumenta la seguridad del proceso, especialmente si se combina con el ARN de control interno incluido en el kit de transcripción inversa QuantiNova para la RT-PCR cuantitativa de dos pasos.

El kit de PCR multiplex QuantiNova aumenta la eficiencia del flujo de trabajo al generar más información a partir de material de muestra limitado mediante el uso de qPCR multiplex ultrarrápida y controlada durante el proceso.

Principio

Los kits de PCR QuantiNova ofrecen análisis de ADNc o ADNg con la máxima especificidad gracias a un novedoso mecanismo de inicio en caliente mediado por anticuerpos (véase la figura "Principio del novedoso mecanismo de inicio en caliente de QuantiNova"). A bajas temperaturas, la ADN polimerasa QuantiNova se mantiene inactiva gracias al anticuerpo QuantiNova y al novedoso aditivo QuantiNova Guard, que estabiliza el complejo. Esto mejora la rigurosidad del inicio en caliente y previene la extensión de cebadores y dímeros de cebadores hibridados de forma inespecífica. A los 2 minutos de alcanzar la temperatura de 95 °C, el anticuerpo QuantiNova y el QuantiNova Guard se desnaturalizan y la ADN polimerasa QuantiNova se activa, lo que permite la amplificación.

Además, la química QuantiNova incluye características que optimizan su flujo de trabajo sin perder la sensibilidad ni la eficiencia de la PCR. Los colorantes inertes en la mezcla maestra y en el tampón de dilución amarillo QuantiNova sirven como indicador visual de que cada reacción se ha configurado correctamente. El color azul de la mezcla maestra aumenta la visibilidad del contenido en el recipiente de reacción y se vuelve verde al añadir los ácidos nucleicos molde diluidos en el tampón de dilución amarillo QuantiNova (véase la figura "Configuración precisa de la reacción indicada por el control de pipeteo integrado"). La formulación única del tampón de PCR incluido en los kits de PCR QuantiNova SYBR mejora la rigurosidad del mecanismo de inicio en caliente y acorta los pasos de ciclado, lo que agiliza la PCR y permite aumentar el rendimiento.

Los kits de PCR multiplex QuantiNova ofrecen resultados altamente sensibles y rápidos en un amplio rango dinámico, tanto en cicladores estándar como rápidos, sin necesidad de optimización. El tampón de PCR rápido, especialmente desarrollado, contiene el aditivo Q-Bond, que reduce significativamente los tiempos de annealing y extensión (véase la figura "Annealing rápido de cebadores").

La amplificación de los genes de referencia y diana en la misma reacción, en lugar de hacerlo por separado, aumenta la fiabilidad de la cuantificación génica al minimizar los errores de manipulación. Además, el ARN de control interno incluido en el kit de transcripción inversa QuantiNova para RT-PCR cuantitativa de dos pasos puede incorporarse para monitorizar el éxito de la transcripción inversa y la qPCR.

El tampón de PCR multiplex QuantiNova incluye una combinación equilibrada de iones K+ y NH4+, así como el exclusivo factor sintético MP. Estos factores, en conjunto, promueven la hibridación estable y eficiente de cebadores y sondas con el ácido nucleico molde, lo que permite una alta eficiencia de PCR (véase la figura "El exclusivo tampón de PCR multiplex promueve una hibridación estable y eficiente"). La mezcla maestra del kit de PCR multiplex QuantiNova se puede almacenar cómodamente a 2–8 °C hasta 12 meses, y la configuración de la reacción es extraordinariamente estable a temperatura ambiente, lo que permite que los procedimientos automatizados aumenten la eficiencia y la precisión.

Procedimiento

Los kits de PCR QuantiNova contienen mezclas maestras listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Simplemente añada ADNg o ADNc molde y cebadores (detección basada en SYBR Green) o ADNg o ADNc molde, cebadores y sondas (detección basada en sonda) a la mezcla maestra y siga el protocolo del manual para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real. El colorante de referencia pasivo ROX se suministra en un tubo aparte y su concentración se puede ajustar según el tipo de termociclador utilizado. Por lo tanto, los kits de PCR QuantiNova pueden utilizarse en prácticamente cualquier termociclador en tiempo real, independientemente del formato o las condiciones de ciclado. Gracias a las concentraciones optimizadas de ROX, se consigue la detección incluso de números de copias bajos mediante el análisis automático de datos.

Los kits de PCR QuantiNova Multiplex contienen mezclas maestras 4x listas para usar que eliminan la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Simplemente añada hasta 800 ng de ADN molde y conjuntos de cebadores-sonda a la mezcla maestra y siga el protocolo del manual para obtener resultados rápidos y fiables en cualquier termociclador en tiempo real. Los kits incluyen el colorante de referencia pasivo ROX en un tubo aparte para ajustar la concentración de ROX según sea necesario para su instrumento.

Para obtener resultados óptimos en la RT-PCR de dos pasos en tiempo real, recomendamos sintetizar ADNc con el kit de transcripción inversa QuantiNova, que permite una síntesis rápida de ADNc en tan solo 20 minutos con eliminación integrada de la contaminación del ADN genómico. Además, incluye el ARN de control interno QuantiNova, que permite monitorizar durante el proceso el éxito de la transcripción inversa y la qPCR.

Para optimizar el flujo de trabajo, recomendamos combinar los kits QuantiNova con nuestros ensayos o paneles de PCR en tiempo real QuantiNova prediseñados. Estos ofrecen una cuantificación precisa de ARNm o transcripciones largas de ARN no codificante, independientemente de su abundancia. Elija entre una amplia gama de conjuntos de cebadores prediseñados para humanos, ratones y ratas, o personalice sus propios ensayos y paneles con nuestras herramientas de diseño avanzadas.

Nuestros ensayos QuantiNova LNA PCR y QuantiNova LNA Probe PCR utilizan tecnología LNA para una mayor sensibilidad, lo que permite obtener perfiles de expresión genética imparciales y conocimientos científicos más rápidos.

Aplicaciones

El kit de PCR QuantiNova SYBR Green permite el análisis de expresión génica basado en SYBR Green de dianas de ADNc y el análisis cuantitativo de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Esto incluye instrumentos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, LIFE Technologies, Roche y Agilent, así como el Rotor-Gene Q.

Los kits de PCR con sonda QuantiNova se pueden utilizar para el análisis de expresión génica basado en sondas de dianas de ADNc y el análisis cuantitativo de ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Esto incluye equipos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche y Agilent.

Los kits de PCR multiplex QuantiNova permiten el análisis multiplex de la expresión génica de dianas de ADNc o ADNg en cualquier termociclador en tiempo real. Para aprovechar al máximo las ventajas del multiplex, recomendamos instrumentos con capacidad de hasta 5 plexos, como el Rotor-Gene Q.