Qiagen, 208652, Kit QuantiNova Pathogen +IC (100) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

Para reacciones de 100 x 20 µl: 1 x 500 µl de mezcla maestra de patógenos QuantiNova, 1 x 500 µl de tampón de dilución de plantilla amarilla, 1 x 250 µl de colorante de referencia ROX, 1 x 1,9 µl de agua sin ARNasa, 1 x 1500 µl de tampón de dilución de ácidos nucleicos, 1 x 100 µl de ARN de control interno, 1 x 100 µl de ADN de control interno, 1 x 200 µl de ensayo de sonda IC
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Características

- Controles internos preoptimizados sin coste adicional
- PCR de 4 plexos (RT) para la detección tanto de objetivos patógenos como de control interno
- Procedimiento único de arranque en caliente de dos fases para una cómoda configuración a temperatura ambiente
- RT estable incluido en la mezcla maestra, lo que proporciona un protocolo fácil de usar
- Control visual del pipeteo para minimizar errores

Detalles del producto

El kit QuantiNova Pathogen +IC está diseñado para la detección sensible y rápida mediante PCR en tiempo real (RT-) de ácidos nucleicos de patógenos mediante sondas específicas de secuencia. El kit contiene reactivos para la detección en tiempo real de 4 plexos de dianas patógenas definidas por el usuario (p. ej., virus, bacterias, hongos, etc.), además del control interno (CI) QuantiNova de ARN o ADN. Tanto los CI como el ensayo se incluyen para su uso como controles de extracción o amplificación, lo que permite una correcta interpretación de los resultados negativos de la detección. Además, este kit ultrarrápido y listo para usar ofrece una práctica configuración de la reacción a temperatura ambiente para un flujo de trabajo optimizado y automatizado, así como un control visual del pipeteo para optimizar la manipulación y la seguridad. Para mayor comodidad, la mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C.

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Actuación

El kit QuantiNova Pathogen +IC permite la detección simultánea de dianas virales de ARN o ADN y el control interno (CI) QuantiNova en un amplio rango lineal sin pérdida de sensibilidad durante la multiplexación. El protocolo se ha desarrollado para ejecutar experimentos de ciclado ultrarrápido con alta fiabilidad en la mayoría de los cicladores. La amplificación combinada de dianas patógenas y el control interno (CI) de ARN o ADN aumenta la seguridad durante el proceso al garantizar la correcta interpretación de los resultados negativos. El CI incluido puede utilizarse para supervisar el proceso de purificación y/o amplificación de ácidos nucleicos, mientras que el control visual de pipeteo permite una comprobación visual tras el pipeteo manual o robótico (véase la figura "Configuración precisa de la reacción indicada por el control de pipeteo integrado"). Con el exclusivo procedimiento de arranque en caliente de dos fases, es posible realizar la configuración de la reacción manual o automatizada a temperatura ambiente sin comprometer el rendimiento (véase la figura "Principio del novedoso mecanismo de arranque en caliente de dos fases QuantiNova"). El kit QuantiNova Pathogen +IC es robusto incluso en presencia de inhibidores y permite el uso de cebadores/sondas degenerados. El kit ofrece qPCR multiplex ultrarrápida y controlada durante el proceso, lo que aumenta la eficiencia y la confiabilidad del flujo de trabajo.

Principio

Para lograr una mayor seguridad durante el proceso mediante la correcta interpretación de los resultados negativos, cada kit QuantiNova Pathogen +IC contiene reactivos para la detección múltiple en tiempo real de dianas patógenas definidas por el usuario con controles internos. La amplificación de los genes diana y de control en la misma reacción aumenta la fiabilidad al minimizar los errores de manipulación. El IC suministrado puede utilizarse para comprobar el éxito de la amplificación (p. ej., la exclusión de inhibidores de la PCR) o añadirse a la muestra antes de la purificación del ácido nucleico para controlar tanto la eficiencia del proceso de purificación como la amplificación por PCR o RT-PCR. La PCR en tiempo real y la RT-PCR de un solo paso pueden ejecutarse simultáneamente utilizando el mismo protocolo. El kit también utiliza un procedimiento de arranque en caliente de dos fases (véase la figura "Principio del novedoso mecanismo de arranque en caliente de dos fases de QuantiNova"). Esto incluye la activación mediada por calor de la transcriptasa inversa HotStaRT-Script a 50 °C y de la polimerasa de PCR a 95 °C. A bajas temperaturas, HotStaRT-Script forma un complejo con una molécula bloqueadora de RT, lo que provoca su inactivación. A 50 °C, el complejo se disocia y se libera la enzima activa HotStaRT-Script. La ADN polimerasa QuantiNova se mantiene inactiva gracias al anticuerpo QuantiNova y a un novedoso aditivo, QuantiNova Guard, que estabiliza el complejo. Esto mejora la rigurosidad del procedimiento de inicio en caliente y previene la extensión de cebadores y dímeros de cebadores no específicamente hibridados. A los 2 minutos de elevar la temperatura a 95 °C, el anticuerpo QuantiNova y QuantiNova Guard se desnaturalizan y la ADN polimerasa QuantiNova se activa, lo que permite la amplificación por PCR. Este exclusivo inicio en caliente de dos fases permite que la configuración de la reacción se mantenga estable durante al menos una hora a temperatura ambiente, lo que evita la creación de artefactos y facilita la configuración automatizada de la reacción. Además, la mezcla maestra suministrada con el kit contiene un colorante azul inerte que no interfiere con la transcripción inversa ni con la PCR en tiempo real, sino que aumenta la visibilidad en el tubo o pocillo. El tampón de dilución QuantiNova Yellow Template contiene un colorante amarillo inerte. Cuando el ácido nucleico molde, diluido con el tampón de dilución de plantilla QuantiNova Yellow Template, se añade a la mezcla maestra, el color de la solución cambia de azul a verde, lo que proporciona una indicación visual de la configuración correcta del pipeteo y la reacción (véase la figura Configuración de reacción precisa indicada por el control de pipeteo integrado). La mezcla maestra incluye una combinación equilibrada de iones K+ y NH4+, así como el exclusivo factor sintético MP, que juntos promueven la hibridación estable y eficiente de los cebadores y las sondas con el ácido nucleico molde, lo que permite una alta eficiencia de PCR incluso en reacciones multiplex (véase la figura El exclusivo tampón de PCR multiplex promueve una hibridación estable y eficiente). El tampón de PCR especialmente desarrollado contiene Q-Bond, que reduce significativamente los tiempos de desnaturalización, hibridación y extensión (véase la figura Mecanismo de ciclado rápido durante la hibridación). El tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect, suministrado con el kit, estabiliza los estándares de ARN y ADN durante la dilución y la configuración de la reacción y evita la pérdida de ácidos nucleicos en superficies de plástico, como tubos o puntas de pipeta. La mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C durante hasta 12 meses y la reacción es estable a temperatura ambiente durante al menos una hora, lo que resulta conveniente para los procedimientos automatizados.