Qiagen, 211035, Kit de viales QuantiTect Virus +ROX (1000)

Para reacciones de 1000 x 50 µl: QuantiTect Virus NR Master Mix (sin colorante ROX), solución de colorante ROX, QuantiTect Virus RT Mix, agua sin ARNasa, tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect

Características

- Alta sensibilidad en ensayos simples y multiplex
- Detección de ARN y/o ADN viral en la misma reacción
- Detección clara de señales positivas débiles
- Protocolos universales rápidos de 2 pasos
- Mezcla maestra 5x para una mayor sensibilidad con más entrada de muestra

Actuación

La amplificación con los kits QuantiTect Virus proporciona curvas sigmoideas pronunciadas en un rango de diluciones, incluso con cantidades bajas de plantilla y valores de CT elevados (véase la figura "Determinación inequívoca de valores de CT en un amplio rango dinámico"). Esto permite una determinación precisa del valor de CT para la cuantificación de ácidos nucleicos virales mediante PCR en tiempo real.

Los ensayos multiplex permiten la detección de múltiples objetivos de ARN y/o ADN viral más controles internos en un amplio rango lineal sin pérdida de sensibilidad (consulte las figuras "Detección confiable de ARN viral en un amplio rango lineal" y "Detección mejorada de bajas cantidades de ARN viral").

El tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect, suministrado con los kits, estabiliza los estándares de ARN y ADN durante la dilución y la preparación de la reacción, y evita la pérdida de ácidos nucleicos en superficies plásticas, como tubos o puntas de pipeta. Este tampón permite una dilución fiable de los estándares utilizados para cuantificar ácidos nucleicos virales, ofreciendo un amplio rango lineal, desde valores de CT bajos hasta altos, y garantiza un almacenamiento más prolongado de los estándares sin degradación (véase la figura "Dilución y almacenamiento fiables de estándares de ARN").

Principio

Componente del kit: Característica
5x QuantiTect Virus Master Mix: Mezcla maestra concentrada
ADN polimerasa HotStarTaq Plus: activación de 5 min a 95ºC
Tampón de virus QuantiTect: combinación equilibrada de iones NH 4 + y K +
Factor sintético MP: análisis multiplexado fiable de hasta 4 genes en el mismo tubo
Componentes adicionales del kit: QuantiTect Virus RT Mix
Tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect: formulación de tampón patentada para la dilución y el almacenamiento de estándares de ácidos nucleicos.

Los kits QuantiTect Virus ofrecen una detección altamente sensible de ácidos nucleicos virales en ensayos simples o multiplex a la primera (véase el diagrama de flujo "Kits multiplex de QIAGEN"). La mezcla maestra optimizada garantiza que los productos de PCR en una reacción multiplex se amplifiquen con la misma eficiencia y sensibilidad que los productos de PCR en una reacción de amplificación simple correspondiente.

La amplificación de los genes control y diana en la misma reacción, en lugar de reacciones separadas, aumenta la fiabilidad de la cuantificación génica al minimizar los errores de manipulación. El tampón QuantiTect Virus Buffer contiene una combinación equilibrada de iones K+ y NH₄₃, así como estabilizadores sintéticos únicos de Factor MP. Estos estabilizadores, en conjunto, promueven una hibridación estable y eficiente de cebadores y sondas con el ácido nucleico molde, lo que permite una alta eficiencia de PCR (véase la figura "Tampón PCR único"). Además, la formulación única de la transcriptasa inversa Sensiscript garantiza una transcripción inversa altamente sensible del ARN viral, mientras que la ADN polimerasa HotStarTaq Plus proporciona un arranque en caliente riguroso, lo que previene la formación de productos inespecíficos.

Procedimiento

Tinte ROX: Kit
Se suministra en mezcla maestra: QuantiTect Virus Kit
Se suministra en un tubo separado: Kit de viales QuantiTect Virus +ROX

Los kits QuantiTect Virus ofrecen análisis por PCR en tiempo real de alta sensibilidad de ácidos nucleicos virales (ARN y/o ADN) y controles internos mediante sondas específicas de secuencia. Las reacciones pueden realizarse con o sin transcripción inversa, lo que permite un diseño flexible de ensayos multiplex para detectar dianas de ARN, dianas de ADN o ambas. Siga el protocolo del manual para obtener resultados rápidos y fiables.

Los kits están disponibles con o sin colorante de referencia pasivo ROX en la mezcla maestra (ver tabla).

Para aplicaciones de RT-PCR de un solo paso de punto final rápidas y altamente sensibles, incluida la detección de virus, recomendamos utilizar el kit QIAGEN OneStep RT-PCR.