Qiagen, 211454, Kit QuantiFast Pathogen RT-PCR + IC (400)

Para reacciones de 400 x 25 µl: mezcla maestra, mezcla RT, ensayo de control interno liofilizado, ARN de control interno liofilizado, solución de colorante ROX, solución de colorante con alto contenido de ROX, agua sin ARNasa, tampón de dilución de ácidos nucleicos, tampón TE

Características

- Detección simultánea del objetivo patógeno y del control interno
- Mezcla maestra 5x para una mayor sensibilidad con más entrada de muestra
- Interpretación correcta de resultados negativos para una mayor seguridad del proceso
- Detección clara de señales de objetivos positivos débiles
- Protocolo rápido y universal tanto en cicladores estándar como rápidos

Detalles del producto

Los kits QuantiFast Pathogen +IC están diseñados para la detección sensible y rápida de ácidos nucleicos de patógenos mediante PCR en tiempo real o RT-PCR en un solo paso, utilizando sondas específicas de secuencia. Para garantizar una alta seguridad del proceso mediante la correcta interpretación de los resultados negativos de detección, cada kit contiene reactivos para la detección multiplex en tiempo real de hasta cuatro dianas patógenas definidas por el usuario (p. ej., virus, bacterias, hongos, etc.), además del control interno (CI). Hay dos formatos de kit disponibles: el kit QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC para la detección de ARN viral, que contiene una plantilla de control de ARN interno y el juego de cebadores/sonda de control interno, o el kit QuantiFast Pathogen PCR +IC para la detección de ADN viral, bacteriano o fúngico, que contiene una plantilla de control de ADN interno y el juego de cebadores/sonda de control interno. Con ambos kits, ROX se suministra en dos tubos de diferentes concentraciones, lo que permite su uso en prácticamente cualquier instrumento de tiempo real. Para mayor comodidad, la mezcla maestra se puede almacenar a 2–8 °C.

Actuación

Los kits QuantiFast Pathogen +IC permiten la detección simultánea de dianas virales de ARN o ADN, junto con el control interno suministrado, en un amplio rango lineal sin pérdida de sensibilidad durante la multiplexación (véanse las figuras "Detección sensible de norovirus en el Rotor-Gene Q" y "Alta linealidad y precisión en la detección de singleplex y duplex"). El protocolo se ha desarrollado para ejecutar experimentos de ciclado rápido en la mayoría de los cicladores con alta fiabilidad (véanse las figuras "Detección sensible de BHV-1 en el Rotor-Gene Q" y "Detección sensible de BHV-1 en el ABI 7500"). La amplificación combinada de la diana del patógeno y el control interno mediante los kits QuantiFast Pathogen +IC aumenta la seguridad del proceso de detección de patógenos, garantizando la correcta interpretación de los resultados negativos (véase la figura "Interpretación correcta de los resultados negativos").

El tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect, suministrado con los kits, estabiliza los estándares de ARN y ADN durante la dilución y la preparación de la reacción, y evita la pérdida de ácidos nucleicos en superficies plásticas, como tubos o puntas de pipeta. Permite una dilución fiable de los estándares utilizados para cuantificar ácidos nucleicos virales, ofreciendo un amplio rango lineal, desde valores de CT bajos hasta altos. El tampón garantiza un almacenamiento más prolongado de los estándares sin degradación (véase la figura "Dilución y almacenamiento fiables de estándares de ARN").

Principio

Componente del kit: Características
Mezcla maestra de PCR para patógenos QuantiFast 5x: mezcla maestra concentrada
ADN polimerasa HotStarTaq Plus: activación de 5 min a 95ºC
Tampón de patógenos QuantiFast: combinación equilibrada de iones NH 4 + y K +
Factor sintético MP: análisis multiplexado fiable de hasta 4 genes en el mismo tubo
Aditivo Q-Bond exclusivo: tiempos de ejecución de PCR más rápidos, lo que permite resultados más rápidos y más reacciones por día
Ensayo de control interno: Plantilla de control interno
ARN de control interno en el kit QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC: un control de amplificación de ARN universal que se puede utilizar con diferentes ensayos de patógenos
Ensayo de control interno: conjunto de cebador/sonda premezclado (sonda TaqMan®) marcado con MAX (equivalente a HEX, VIC, etc.)
Componentes adicionales del kit: QuantiFast Pathogen RT Mix*
Solución de colorante ROX: Tubo independiente de colorante de referencia pasivo para la normalización de señales fluorescentes en sistemas de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500. Opcional: Se puede utilizar en instrumentos Stratagene de Agilent.
Solución de colorante High-ROX: tubo independiente de colorante de referencia pasivo para la normalización de señales fluorescentes en los sistemas de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7900 y StepOne
Tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect: formulación patentada de tampón para la dilución y el almacenamiento de estándares de ácidos nucleicos

Para garantizar una alta seguridad del proceso mediante la correcta interpretación de los resultados negativos, cada kit QuantiFast Pathogen _IC contiene reactivos para la detección múltiple en tiempo real de un patógeno diana definido por el usuario con el control interno. La amplificación de los genes control y diana en la misma reacción, en lugar de reacciones separadas, aumenta la fiabilidad de la cuantificación génica al minimizar los errores de manipulación.

Los kits QuantiFast Pathogen +IC proporcionan una detección sensible y rápida de ácidos nucleicos de patógenos mediante PCR multiplex en tiempo real o RT-PCR de un solo paso en el primer intento (véase el diagrama de flujo "Kits multiplex QIAGEN"). La mezcla maestra optimizada garantiza que los productos de PCR en una reacción multiplex se amplifiquen con la misma eficiencia y sensibilidad que los productos de PCR en una reacción de amplificación única correspondiente. El tampón de PCR rápida, especialmente desarrollado, contiene el novedoso aditivo Q-Bond, que reduce significativamente los tiempos de desnaturalización, annealing y extensión (véase la figura "Annealing rápido de cebadores"). Una combinación equilibrada de iones K+ y NH₄+, así como el exclusivo Factor MP sintético, promueven un annealing estable y eficiente de cebadores y sondas al molde de ácido nucleico, lo que permite una alta eficiencia de PCR (véase la figura "Tampón de PCR único"). Además, la formulación única de la transcriptasa inversa Sensiscript garantiza una transcripción inversa altamente sensible del ARN viral, mientras que la ADN polimerasa HotStarTaq Plus proporciona un arranque en caliente riguroso, evitando la formación de productos inespecíficos.

Procedimiento

Los kits QuantiFast Pathogen +IC ofrecen un procedimiento sencillo para la detección de un patógeno definido por el usuario y el control interno. Contienen una mezcla maestra lista para usar para la detección en tiempo real de ARN viral (RT-PCR de un solo paso) o ADN viral, bacteriano y fúngico (PCR). No es necesario optimizar las condiciones de reacción ni de ciclado. Simplemente mezcle la mezcla maestra suministrada con el ensayo de patógenos (cebadores y sonda), el ensayo de control interno suministrado y el ADN o ARN del control interno. Como alternativa, si se ha añadido el control interno al procedimiento de purificación de la muestra, añada agua sin ARNasa en lugar del ADN o ARN del control interno a la mezcla de reacción. A continuación, añada la muestra de ADN o ARN e inicie la reacción en cualquier ciclador. El manual del kit contiene protocolos optimizados para su uso con sondas TaqMan® en una amplia gama de cicladores. También incluye recomendaciones para la selección de combinaciones de colorantes.

Cada kit QuantiFast Pathogen +IC incluye el ensayo de control interno y el control interno de ADN o ARN para su uso como control de amplificación mediante la adición directa a la mezcla de reacción. Alternativamente, el control interno puede añadirse al proceso de purificación para controlar tanto el proceso de purificación como la amplificación. Para añadir el control interno al proceso de purificación, puede solicitarse por separado un control interno de ADN o ARN altamente concentrado (alta concentración) (véase la figura "Control interno QIAGEN").

Aplicaciones

Los kits QuantiFast Pathogen +IC ofrecen PCR en tiempo real sensible o RT-PCR de un solo paso mediante sondas específicas de secuencia para la detección de ADN y/o ARN de patógenos, incluyendo un control interno. Los kits pueden utilizarse en una amplia gama de termocicladores en tiempo real, incluyendo termocicladores de QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche (excepto termocicladores capilares) y Agilent.