Qiagen, 217184, Kit de suero/plasma miRNeasy (50)

Para 50 preparaciones de ARN total: 50 columnas de centrifugación RNeasy MinElute, tubos de recolección (1,5 ml y 2 ml), reactivo de lisis QIAzol, reactivos y tampones sin ARNasa

Características

- Control interno disponible para normalización
- Volumen de elución mínimo
- ARN de alta pureza adecuado para todas las aplicaciones posteriores
- Procedimientos fáciles y robustos
- Protocolo automatizable

Detalles del producto

El kit miRNeasy para suero/plasma está diseñado para la purificación de ARN total libre de células —principalmente miARN y otros ARN pequeños— a partir de pequeños volúmenes de suero y plasma. El ARN de suero y plasma suele estar compuesto por moléculas de menos de 100 nucleótidos. La purificación se puede automatizar en QIAcube Connect.

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Actuación

El kit miRNeasy para suero/plasma purifica eficazmente el ARN de hasta 200 µl de suero o plasma. El ARN preparado con los kits miRNeasy es altamente puro y está listo para su uso en aplicaciones posteriores sensibles. Los procedimientos miRNeasy minimizan la posibilidad de contaminación con sales o fenol, que podrían interferir con los análisis posteriores.

Principio

Una de las áreas más interesantes de la investigación actual sobre miRNA es la evaluación de los miRNA presentes en muestras de suero o plasma. La presencia de miRNA extracelulares relativamente estables en suero y plasma ha generado gran interés en el posible uso de los cambios en los niveles de estos miRNA como biomarcadores no invasivos para diversas enfermedades. Utilizando ARN purificado de suero o plasma, se ha demostrado la expresión única de varios miRNA en algunos tipos de cáncer. El kit miRNeasy para suero/plasma permite la purificación de ARN a partir de pequeños volúmenes de plasma o suero. El ARN de suero y plasma suele constar de moléculas de <100 nucleótidos. El ARN purificado puede utilizarse posteriormente para el descubrimiento de biomarcadores. El kit miRNeasy para suero/plasma combina la lisis de muestras con fenol/guanidina y la purificación del ARN total con membrana de sílice. El reactivo de lisis QIAzol, incluido en el kit, es una solución monofásica de fenol y tiocianato de guanidina, diseñado para facilitar la lisis de tejidos, inhibir las ARNasas y también para eliminar la mayor parte del ADN celular y las proteínas del lisado mediante extracción orgánica.

Procedimiento

Las muestras de suero o plasma se lisan en el reactivo de lisis QIAzol. Tras añadir cloroformo, el lisado se separa en fases acuosa y orgánica mediante centrifugación. El ARN se distribuye en la fase acuosa superior, mientras que el ADN se distribuye en la interfase y las proteínas en la fase orgánica inferior o interfase. Se extrae la fase acuosa superior y se añade etanol para proporcionar las condiciones de unión adecuadas para todas las moléculas de ARN a partir de aproximadamente 18 nucleótidos. A continuación, la muestra se aplica a la columna de centrifugación RNeasy MinElute, donde el ARN total se une a la membrana y el fenol y otros contaminantes se eliminan eficazmente. El ARN de alta calidad se eluye en un pequeño volumen de agua sin ARNasa. El suero y el plasma contienen principalmente ARN pequeños, por lo que no es necesaria la purificación por separado de las fracciones de ARN pequeñas y grandes.

Purificación automatizada de miRNA en QIAcube

La purificación de ARN total, incluyendo miARN, de la fase acuosa tras la separación de fases se puede automatizar en el QIAcube. El innovador QIAcube utiliza tecnología avanzada para procesar las columnas de centrifugación QIAGEN, lo que permite una integración fluida de la preparación automatizada de muestras de bajo rendimiento en el flujo de trabajo de su laboratorio. La preparación de muestras con el QIAcube sigue los mismos pasos que el procedimiento manual (es decir, lisar, unir, lavar y eluir), lo que le permite seguir utilizando el kit miRNeasy de suero/plasma para la purificación de ARN de alta calidad.

Aplicaciones

- Descubrimiento de biomarcadores
- Perfil de miRNA
- secuenciación de miRNA
- Análisis de miRNA
- Análisis de transferencia Northern
- Análisis de microarrays

El kit de suero/plasma miRNeasy permite la purificación de ARN total libre de células, incluido el miARN, para su uso en una variedad de aplicaciones, entre ellas: