Qiagen, 217684, Kit micro avanzado miRNeasy para tejidos y células (50) icono_0368_ls_gen_ecológico-s

Para 50 preparaciones: columnas de centrifugación RNeasy UCP MinElute, columnas de centrifugación gDNA Eliminator, tubos de recolección, agua sin ARNasa y tampones

Características

- Protocolo sin fenol: no es necesario separar fases ni trabajar bajo un capó.
- Procedimiento rápido y conveniente gracias a la química avanzada y a las columnas eliminadoras de ADNg
- Enriquecimiento eficiente de miRNA y ARN <200 nucleótidos
- ARN puro y consistente para todas las aplicaciones posteriores

Detalles del producto

Los kits avanzados miRNeasy Tissue/Cells son la segunda generación de los consolidados kits miRNeasy. Estas versiones mejoradas combinan una química avanzada sin fenol con columnas eliminadoras de ADNg o placas eliminadoras de ADNg de 96 nucleótidos para un aislamiento de ARN seguro y práctico. Permiten la purificación de ARN total, incluyendo ARN pequeños ≥18 nucleótidos, de tejidos y células animales, incluso en muestras pequeñas. Los kits utilizan columnas de centrifugación para la purificación de ARN de bajo rendimiento. El minikit miRNeasy Tissue/Cells Advanced se puede automatizar en QIAcube Connect.

Actuación

Los kits miRNeasy Tissue/Cells Advanced son alternativas sin fenol a los kits miRNeasy clásicos, sin comprometer la producción ni la calidad del ARN (véanse las figuras «Alta recuperación de miARN sin fenol», «Alta recuperación de miR16 de tejidos y células sin fenol con miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro» y «Alta recuperación de miARN sin fenol con el kit miRNeasy 96 Tissue/Cells Advanced»). Los kits miRNeasy Tissue/Cells Advanced permiten un enriquecimiento eficiente de ARN de hasta aproximadamente 18 nucleótidos.

El microkit miRNeasy Tissue/Cells Advanced purifica eficazmente el ARN de hasta 5 mg de tejido congelado o 1 x 10⁻¹ células, pero también funciona con cantidades significativamente menores de material de partida. El minikit miRNeasy Tissue/Cells Advanced purifica eficazmente el ARN de hasta 30 mg de tejido congelado o 1 x 10⁻¹ células. Con el kit miRNeasy 96 Tissue/Cells Advanced de 96 pocillos se pueden procesar hasta 50 mg de tejido y 1 x 10⁻¹ células.

Los kits miRNeasy Tissue/Cells Advanced incluyen el procedimiento gDNA Eliminator, que permite obtener altos rendimientos de ARN reproducibles y una eliminación eficiente del ADN genómico para aplicaciones sensibles (véanse las figuras «El minikit miRNeasy Tissue/Cells Advanced muestra un mayor rendimiento», «Extracción total de ARN: eliminación eficaz del ADN genómico» y «Las placas gDNA 96 Eliminator garantizan una eliminación eficiente del ADN genómico»). El ARN total con valores RIS de Agilent RIN o QIAxcel Connect System cercanos a 10 se obtiene rutinariamente de tejidos y células cultivadas. A diferencia de los kits de otros proveedores, los kits miRNeasy Tissue/Cells Advanced combinan facilidad de uso y un protocolo sin fenol sin comprometer la calidad ni el rendimiento del ARN (véanse las figuras «El minikit miRNeasy Tissue/Cells Advanced muestra un mejor rendimiento en comparación con los kits de otros proveedores», «Rendimiento competitivo», «Procedimiento rápido» y «El kit miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced ofrece un rendimiento excelente»).

Principio

Los kits avanzados miRNeasy Tissue/Cells combinan la lisis de muestras con guanidina, la eliminación de inhibidores y la purificación del ARN total mediante membrana de sílice, que incluye miARN y otros ARN pequeños. El tampón RLT, incluido en el kit, contiene tiocianato de guanidina, que facilita la lisis y desnaturalización de ARNasas y otras proteínas. Por lo tanto, el ARN de las muestras lisadas en tampón RLT es estable y está protegido de la degradación.

Procedimiento

La lisis de la muestra se logra añadiendo el tampón RLT a las muestras de tejido o células, seguido de un paso de disrupción y homogeneización exhaustiva para garantizar la lisis completa y la inactivación de las ARNasas (véase la figura "Procedimiento del kit miRNeasy Tissue/Cells Advanced"). A continuación, se añade el tampón AL al lisado para optimizar la eliminación del ADNg mediante la columna de centrifugación gDNA Eliminator o la placa gDNA 96 Eliminator. Se añade el tampón RPP al flujo para precipitar los inhibidores (principalmente proteínas con alta concentración en muestras de tejido y células que podrían interferir con el aislamiento del ARN o el análisis posterior) mediante centrifugación. En el caso del kit miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced, se incluye un paso de proteinasa K para eliminar las proteínas. El sobrenadante que contiene el ARN total se transfiere a un nuevo tubo de reacción y se añade isopropanol para proporcionar las condiciones de unión adecuadas para todas las moléculas de ARN ≥18 nucleótidos. La muestra se aplica a una columna de centrifugación RNeasy Mini (miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini), una columna de centrifugación RNeasy UCP MinElute (miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro) o una placa RNeasy® 96 (miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced), donde el ARN total se une a la membrana y se eliminan eficazmente todos los contaminantes. El ARN de alta calidad, incluyendo miARN y otros ARN pequeños, se eluye en un pequeño volumen de agua libre de ARNasas.

Aplicaciones

Los kits avanzados miRNeasy Tissue/Cells permiten la purificación de miRNA y ARN total para una variedad de aplicaciones, que incluyen:

• RNA-seq • RT-PCR cuantitativa en tiempo real • Análisis de microarrays • Análisis Northern blot