Qiagen, 223213, Kit QIAprep y Plasmodium

QIAprep& Plasmodium Kit es una mezcla maestra de qPCR para la detección directa de Plasmodium en muestras de sangre líquida o en muestras de gotas de sangre seca con una sensibilidad de 1 parásito/µL; para 100 reacciones

Características

- Detecta ADN de Plasmodium directamente de manchas de sangre seca o sangre completa, ahorrando tiempo y costos de reactivos.
- Los ensayos de qPCR multiplex permiten la diferenciación de especies (P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi).
- Alta sensibilidad, detectando tan solo 1 parásito/µL
- Compatible con la mayoría de los instrumentos qPCR en tiempo real

Detalles del producto

El kit QIAprep& Plasmodium optimiza la detección de Plasmodium mediante qPCR directa. Los investigadores pueden analizar directamente muestras de sangre seca o sangre completa, lo que reduce el tiempo de manipulación y el coste de los reactivos. El kit permite una alta sensibilidad de detección de Plasmodium a 1 parásito/µL, crucial para la vigilancia de la malaria y la investigación epidemiológica.

Junto con los ensayos QIAprep& Plasmodium, la diferenciación de especies de Plasmodium (P. falciparum frente a no falciparum para la detección de P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi) se lleva a cabo en una reacción en formato multiplex.

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Actuación

Tasa de acierto de QIAprep&​: Tasa de acierto de la extracción clásica de ADN seguida de PCR​
Tarjeta de mancha de sangre: Tarjeta clásica
Muestras: Dilución
Cultivo de P. falciparum​: 1:100​
1:1000​: 7.9​
1:10.000: 0,8
1:100.000: 0,08
Muestra A: 1:100
1:1000​: 16.3​
1:10.000​: 1,6​
1:100.000: 0,16
Muestra B: 1:100
1:1000​: 16.0​
1:10.000: 1,6​
1:100.000: 0,16

El kit QIAprep& Plasmodium permite un análisis rápido de qPCR con resultados en 1–1,5 horas. Ofrece una sensibilidad comparable o superior a la de los métodos tradicionales de extracción de ADN, detectando hasta 1 parásito/µL. El flujo de trabajo es robusto con diferentes tipos de muestras y compatible con los sistemas comunes de qPCR en tiempo real.

El cultivo de P. falciparum y dos muestras humanas (Muestras A y B) se diluyeron con sangre negativa a Plasmodium. El ADN se extrajo con el kit QIAamp® DNA Blood Mini y la parasitemia se cuantificó mediante PCR digital con el kit QIAcuity® Probe PCR en una plataforma QIAcuity Four. Para los flujos de trabajo de gota de sangre seca (DBS), se aplicaron 75 μL de muestras diluidas a una tarjeta QIAcard Bloodstain o Classic y se secaron durante 24 h. Cuatro flujos de trabajo (sangre completa, sedminación, DBS directa y DBS eluida) siguieron los protocolos del manual utilizando el ensayo de detección Pf/Non-Pf. Se registraron las tasas de aciertos (DBS directa N = 6; flujos de trabajo de ADN clásicos N = 4; todos los demás N = 8), y todas las muestras se analizaron en los instrumentos Bio-Rad® CFX96™ o CFX384. (WF = flujo de trabajo)

Principio

Este kit integra el procesamiento directo de muestras con qPCR para detectar Plasmodium spp. En sangre completa, un breve tratamiento térmico libera los ácidos nucleicos. Las muestras de sangre seca pueden utilizarse directamente en la reacción o someterse a un procesamiento mínimo para recuperar el eluido y utilizarlo en diversas reacciones de qPCR con mayor sensibilidad. Este kit es adecuado para ensayos que detectan ADN de Plasmodium con alta especificidad y distinguen entre P. falciparum y especies no falciparum. Un segundo ensayo permite una mayor diferenciación de especies (P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi). Ambos ensayos están disponibles por separado y pueden utilizarse solos o en combinación.

Procedimiento

Ejemplo: Resultados más rápidos en menos pasos
Gotas de sangre seca (DBS): flujo de trabajo directo de DBS
Sangre completa: flujo de trabajo de sangre completa

- Sangre entera fresca
- Sangre entera congelada
- Manchas de sangre seca de sangre completa
- Manchas de sangre seca provenientes de punciones en el dedo

- La tarjeta QIAcard Bloodstain (n.º de cat. WB100014) o la tarjeta QIAcard FTA Classic (n.º de cat. WB 120205 o WB120305) o tarjetas de filtro Whatman
- Perforadora, como por ejemplo, UniCore Punch de 1,2 mm para DBS direct WF (n.° de cat. WB100074), de 3 mm para DBS Elution WF (n.° de cat. WB100078) o perforadoras comparables
- Alfombrilla de corte (n.º de cat. WB100088)

El kit QIAprep& Plasmodium es apto para muestras de sangre completa y gotas de sangre seca (DBS) como material de partida. Dispone de dos flujos de trabajo para cada tipo de muestra: ultrarrápido y ultrasensible.

Tabla 1. Selección del flujo de trabajo adecuado según el tipo de muestra y los requisitos del proceso

Preparación de muestras

El nuevo kit QIAprep& Plasmodium está diseñado para usarse con muestras de sangre completa (por ejemplo, EDTA, citrato, heparina) y muestras de sangre seca. Los tipos de muestra adecuados incluyen:

La tecnología del kit QIAprep& Plasmodium permite utilizar el 20% de sangre en la reacción de PCR.

Se ofrecen dos flujos de trabajo por tipo de muestra (sangre completa o sangre seca). Un flujo de trabajo proporciona resultados ultrarrápidos con pocos pasos. Un flujo de trabajo alternativo proporciona una sensibilidad superior con menos pasos de manipulación (véase la Tabla 1).

Configuración de qPCR

Combine la mezcla maestra QIAprep& con la muestra y la mezcla de ensayo. Cargue la reacción en una placa o vial de PCR y colóquelo en un ciclador. Para más información, consulte el Protocolo de inicio rápido o el Manual del producto.

Ciclismo y detección

Realice la qPCR en tiempo real. Una vez finalizada la prueba, analice los resultados con el software de ciclado adecuado.

Para la generación de manchas de sangre seca, recomendamos lo siguiente:

Aplicaciones

- Vigilancia de la malaria y estudios epidemiológicos
- Detección de Plasmodium en laboratorios de investigación
- Especiación de Plasmodium en laboratorios de investigación
- Estudios de campo que requieren qPCR rápida, sensible y sin extracción