Qiagen, 224113, Kit de ensayo de detección de Pf/Non-Pf

Listo para usar 1 x 0,1 mL PF/Non-PF RNaseP, 20x Oligomix; para 100 reacciones

Características

- Detecta especies de Plasmodium falciparum y no falciparum en una sola reacción en un ensayo primario
- Diferencia P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi en un ensayo secundario
- Adecuado para sangre completa líquida y muestras de sangre seca (DBS)
- qPCR directa a partir de la muestra para ahorrar tiempo y costes de reactivos
- Alta sensibilidad, detectando hasta 1 parásito/µL

Detalles del producto

El ensayo de detección Pf/Non-Pf y el ensayo de detección Pv/Pm/Po/Pk junto con el kit QIAprep& Plasmodium proporcionan un enfoque RT-qPCR rápido, directo y rentable para detectar y diferenciar especies de Plasmodium.

El ensayo de detección Pf/Non-Pf detecta P. falciparum frente a especies no pertenecientes a P. falciparum. Además, este ensayo incluye RNasa P como control durante el proceso.

Si se detectan especies distintas de falciparum, el ensayo de detección Pv/Pm/Po/Pk diferencia entre P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi.

Los ensayos son más adecuados para su uso con el kit QIAprep& Plasmodium.

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Actuación

Tasas de acierto: DBS WF directo
Tarjeta de mancha de sangre: Tarjeta clásica
Paquete de ADN artificial: 200 copias/reacción
20 copias/reacción: 100%
5 copias/reacción: 100%
ADN artificial Pm​: 200 copias/reacción​
20 copias/reacción: 100%
5 copias/reacción: 100%
ADN artificial Po​: 200 copias/reacción​
20 copias/reacción: 100%
5 copias/reacción: 100%
ADN artificial Pv​: 200 copias/reacción​
20 copias/reacción: 100%
5 copias/reacción: 100%

El ensayo de detección Pf/Non-Pf ofrece alta sensibilidad y especificidad para detectar Plasmodium falciparum y especies no falciparum en una sola reacción a 1 parásito/µL. Incluso si las especies falciparum y no falciparum están presentes juntas en una muestra, el ensayo puede detectarlas con fiabilidad.

Si el ensayo de detección Pf/Non-Pf indica la presencia de especies distintas de P. falciparum o en casos donde P. falciparum no es común en la región de interés, el ensayo de detección Pv/Pm/Po/Pk sería el ensayo de elección para identificar especies distintas de P. falciparum. Este ensayo permite la identificación a nivel de especie de P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi en una sola reacción. Mantiene una alta sensibilidad, lo que garantiza una detección precisa a 1 parásito/µL.

Ambos ensayos son aptos para su uso con sangre líquida o gotas de sangre seca (DBS), lo que los hace ideales para aplicaciones como la vigilancia y la investigación epidemiológica. Están diseñados para una amplia compatibilidad con la mayoría de las plataformas de qPCR en tiempo real, lo que permite una integración fluida en los flujos de trabajo de pruebas moleculares existentes. Con resultados disponibles en aproximadamente una hora o una hora y media, estos ensayos facilitan la toma de decisiones rápida en la investigación y el control de la malaria.

El ensayo de diferenciación de especies se probó con ADN artificial en muestras de sangre negativas utilizando el kit QIAprep& Plasmodium y los diferentes flujos de trabajo. El ADN artificial se añadió a la mezcla maestra. Los flujos de trabajo de DBS se procesaron con dos tipos de tarjetas diferentes (QIAcard Bloodstain y QIAcard FTA Classic). Pm = Plasmodium malariae, Po = Plasmodium ovale, Pv = Plasmodium vivax, Pk = Plasmodium knowlesi, WF = flujo de trabajo, rxn = reacción.

Principio

Los ensayos de detección Pf/Non-Pf y Pv/Pm/Po/Pk son ensayos multiplex basados ​​en qPCR que detectan y diferencian especies de Plasmodium directamente a partir de sangre líquida o gotas de sangre seca (DBS). Este enfoque optimizado reduce costos y tiempo de manipulación, y minimiza los pasos de procesamiento de muestras en comparación con los métodos de PCR tradicionales.

El ensayo de detección Pf/Non-Pf distingue entre especies de P. falciparum y no falciparum en una sola reacción. El ensayo de detección Pv/Pm/Po/Pk identifica y distingue entre P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi. El sistema de detección se basa en cebadores específicos de cada especie y sondas fluorescentes que generan señales en canales de detección distintos.

Procedimiento

El ensayo de detección de Pf/Non-Pf y el ensayo de detección de Pv/Pm/Po/Pk siguen un flujo de trabajo de qPCR simple y eficiente. Añada 1 µL de la mezcla de ensayo a una reacción de 20 µL, junto con la muestra (sangre líquida o una muestra de sangre seca). Cargue la reacción preparada en un ciclador de PCR en tiempo real y ejecútela según las condiciones de ciclado recomendadas.

El ensayo de detección Pf/Non-Pf detecta P. falciparum en el canal FAM y especies no falciparum en el canal Cy5, mientras que el control interno (canal HEX) confirma la integridad de la muestra y la eficiencia de la PCR.

Si P. falciparum no está presente en la región geográfica de investigación o se han detectado especies distintas de falciparum con el ensayo primario, puede identificar las especies particulares: P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi con el ensayo de detección Pv/Pm/Po/Pk.

Todo el proceso proporciona resultados claros en aproximadamente una hora y media, lo que garantiza una identificación rápida y confiable de especies para la investigación y la vigilancia de la malaria.