Qiagen, 231124, Kit de clonación por PCR de QIAGEN (40)

Para 40 reacciones: 2x Ligation Master Mix (200 µl), pDrive Cloning Vector (2,0 µg), agua destilada (1,7 ml)

Características

- Solo 40 minutos desde el producto PCR hasta las células sembradas
- Mezcla maestra de ligadura lista para usar
- Hibridación UA de alta especificidad para una clonación eficiente
- Células competentes suministradas con el kit PCR Cloning plus de QIAGEN
- Sembrado inmediato de células competentes transformadas

Detalles del producto

Los kits de clonación por PCR de QIAGEN ofrecen reacciones de ligadura listas para usar. Contienen vectores de clonación linealizados con protuberancias U en cada extremo 3', lo que permite ligar y clonar directamente productos de PCR con protuberancias A en el extremo 3' con alta eficiencia y rapidez. El kit de clonación por PCR plus de QIAGEN también proporciona células de E. coli competentes y medio SOC para una transformación eficiente.

Actuación

Kit de clonación por PCR de QIAGEN: kit de clonación mediada por topoisomerasa
40 min: ≥70 min

El kit de clonación por PCR de QIAGEN combina la última tecnología de ligadura con una combinación única de funciones que ahorran tiempo para una clonación rápida, sencilla y altamente eficiente de productos de PCR generados con Taq y otras ADN polimerasas sin corrección de errores. El kit de clonación por PCR de QIAGEN superó a los kits probados de otros proveedores, garantizando resultados satisfactorios. La clonación en el vector de clonación pDrive es mucho más rápida en comparación con los vectores de clonación basados ​​en TA (véase la figura "Clonación altamente específica con un tiempo de ligadura más corto de 30 min" y la tabla "Tiempo desde el producto de PCR hasta las células sembradas para diferentes métodos de clonación").

Tiempo transcurrido desde el producto de PCR hasta las células sembradas para diferentes métodos de clonación

El kit QIAGEN PCR Cloning plus se suministra con células QIAGEN EZ Competent, que no requieren esta incubación de recuperación que consume mucho tiempo para lograr una transformación de alta eficiencia (>108 unidades formadoras de colonias (UFC) por microgramo de ADN; consulte la figura "Transformación sin incubación de recuperación").

Principio

Componente: Kit de clonación por PCR de QIAGEN
Vector de clonación de pDrive: +
Mezcla maestra de ligadura: +
Agua destilada: +
Células competentes QIAGEN EZ: –
Medio SOC: –

El vector de clonación pDrive (véase la figura "Vector de clonación pDrive") permite la clonación altamente eficiente de productos de PCR mediante hibridación UA. El vector se suministra en forma lineal con una protuberancia U en cada extremo 3', que hibrida con alta especificidad con la protuberancia A de los productos de PCR generados por Taq y otras ADN polimerasas sin corrección de errores. El vector de clonación pDrive (véase la figura "Vector de clonación pDrive") presenta diversas características útiles diseñadas para facilitar el análisis de productos de PCR clonados. Estas incluyen un gran número de sitios únicos de reconocimiento de enzimas de restricción, sitios de cebadores de secuenciación universales y promotores para la transcripción in vitro. Además, el vector permite la selección con ampicilina y kanamicina, así como el cribado azul/blanco de colonias recombinantes.

Los productos de PCR se clonan eficientemente en el vector de clonación pDrive en menos tiempo que el requerido para los vectores de clonación basados ​​en TA (véase la figura "Clonación altamente específica con un tiempo de ligación más corto de 30 min"). Además, dado que T es la base con mayor probabilidad de hibridar con bases no complementarias (es decir, G, C y T), los vectores con una protuberancia de T tienen mayor probabilidad de autohibridarse o de clonar cebadores o cebadores hibridados, lo que resulta en un mayor número de colonias con falsos positivos. Por el contrario, la mayor eficiencia de clonación del vector de clonación pDrive indica que U tiene menor tolerancia al apareamiento de bases inespecífico.

La mezcla maestra de ligadura, suministrada en un práctico formato premezclado, está diseñada específicamente para proporcionar condiciones de hibridación óptimas para una clonación eficiente.

El uso de células competentes QIAGEN EZ en el kit QIAGEN PCR Cloning plus agiliza y simplifica aún más el proceso de clonación. Las células transformadas suelen incubarse en medio SOC para recuperarse y tener tiempo de expresar resistencia a los antibióticos. Por el contrario, las células competentes QIAGEN EZ no requieren esta larga incubación de recuperación para lograr una transformación de alta eficiencia (>10⁻¹ unidades formadoras de colonias (UFC) por microgramo de ADN; véase la figura "Transformación sin incubación de recuperación").

Componentes incluidos con los kits de clonación por PCR de QIAGEN

Procedimiento

Simplemente mezcle el producto de PCR directamente con el vector de clonación pDrive y la mezcla maestra de ligación, incube y añada la reacción de ligación a las células competentes para su transformación. Las células competentes QIAGEN EZ incluidas en el kit PCR Cloning plus de QIAGEN no requieren incubación de recuperación en medio SOC tras la transformación, por lo que pueden sembrarse inmediatamente en placas de agar/ampicilina.

El procedimiento del kit de clonación PCR de QIAGEN (véase el diagrama de flujo "Procedimiento del kit de clonación PCR plus de QIAGEN") es mucho más rápido que los métodos de clonación convencionales de extremos pegajosos y romos, basados ​​en TA y mediados por topoisomerasa. La ligadura tarda 30 minutos, mientras que la transformación y la siembra con células competentes QIAGEN EZ solo tardan 10 minutos, lo que hace que el procedimiento completo, desde el producto de PCR hasta las células sembradas, solo dure 40 minutos.

Aplicaciones

Los kits de clonación por PCR de QIAGEN son adecuados para clonar cualquier producto de PCR con un solo extremo A saliente en cada extremo 3'. Los productos de PCR generados con Taq y otras ADN polimerasas no correctoras pueden clonarse directamente sin preparación. Los kits con ADN polimerasas correctoras, como el kit HotStar HiFidelity Polymerase y el kit QIAGEN LongRange PCR, generan productos de PCR con extremos A salientes y también son ideales para su uso directo con los kits de clonación por PCR de QIAGEN.