Qiagen, 249975, Paneles personalizados de PCR de sonda LNA QuantiNova

Placa lista para usar con una selección personalizada de ensayos prediseñados o personalizados en formato de 96 o 384 pocillos para cualquier ciclador. Pedido mínimo de 4 a 12 placas, según la configuración; descuento al pedir 6 o más copias de la misma placa: 15 % de descuento para 6-11 placas; 30 % de descuento para 12-23 placas; 50 % de descuento para más de 24 placas.

Características

- Panel totalmente personalizable que contiene cualquiera de nuestros 1,3 millones de ensayos prediseñados y/o ensayos personalizados
- Fácil realización de pedidos en línea a través de la intuitiva herramienta de creación personalizada
- Sensibilidad y especificidad excepcionales utilizando cebadores cortos mejorados con LNA y sondas de hidrólisis marcadas con FAM
- Estabilidad para la configuración de temperatura ambiente que permite la automatización
- Resultados robustos y reproducibles en menos de 2 horas utilizando el kit PCR QuantiNova Probe

Detalles del producto

Los paneles personalizados de PCR con sonda LNA QuantiNova permiten la creación rápida y fiable de perfiles de expresión génica mediante qPCR basada en sondas de hidrólisis. Estos paneles, totalmente personalizables, le permiten elegir entre cualquiera de nuestros ensayos de PCR con sonda LNA QuantiNova prediseñados o sus propios ensayos personalizados. La mejora de LNA nos permite diseñar cebadores más cortos con una Tm óptima, lo que permite un posicionamiento flexible en la diana para una discriminación de secuencia óptima. Una validación exhaustiva del diseño garantiza un rendimiento superior y una detección robusta. Optimizado con la química QuantiNova, el sencillo flujo de trabajo se completa en menos de 2 horas y es lo suficientemente robusto como para permitir la configuración a temperatura ambiente, la automatización y la ejecución diferida. También ofrecemos paneles flexibles, semipersonalizables a partir de los ensayos de nuestros paneles Focus disponibles.

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Actuación

Mejora experta de LNA para un rendimiento superior de qPCR

Todos los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe se desarrollan utilizando estrictos criterios de diseño y algoritmos validados en laboratorio. Veinte años de experiencia en el diseño de LNA nos han permitido optimizar nuestro sofisticado algoritmo, que incorpora más de 50 parámetros diferentes para garantizar el ensayo más óptimo para la detección exitosa de la diana. Cada conjunto de cebador-sonda ofrece la máxima especificidad y eficiencia para obtener resultados fiables y precisos. La mejora de LNA permite la normalización de la Tm en todo el panel, lo que proporciona a los cebadores y sondas una mayor afinidad de unión, lo que aumenta drásticamente la sensibilidad y especificidad del ensayo.

La mayor sensibilidad garantiza una excelente eficiencia de amplificación de hasta una molécula de ARN, lo que facilita la detección de dianas de baja abundancia, como lncRNA, a partir de menos material de partida (véase la figura). Los ensayos de PCR con sonda QuantiNova LNA proporcionan una cuantificación precisa, sensible y lineal de dianas en un amplio rango dinámico y la figura. Los ensayos de PCR con sonda QuantiNova LNA permiten la detección de ARNm tanto de alta como de baja expresión. La mayor especificidad, gracias a la inteligente colocación de LNA, proporciona una alta relación señal-ruido, lo que permite la discriminación de secuencias que difieren en un solo nucleótido y elimina la amplificación inespecífica y la formación de dímeros de cebadores.

La alta afinidad de unión de las bases de LNA aumenta la flexibilidad de la colocación de cebadores y sondas en el transcrito, lo que nos permite usar un posicionamiento inteligente para diseñar ensayos para dianas que de otro modo serían difíciles de analizar. Esto proporciona una cuantificación robusta y fiable, incluso para dianas ricas en AU, transcripciones de baja abundancia, dianas con alta estructura secundaria y muestras de alta complejidad.

Principio

Formato de placa: Número de ensayos diferentes por placa
Disco de 96 o 100 pocillos: 8 ensayos
12 ensayos: 12 ensayos x 8 muestras
16 ensayos: 16 ensayos x 6 muestras
24 ensayos: 24 ensayos x 4 muestras
32 ensayos: 32 ensayos x 3 muestras
48 ensayos: 48 ensayos x 2 muestras
96 ensayos: 96 ensayos x 1 muestra
384 pocillos: 8 ensayos
12 ensayos: 12 ensayos x 32 muestras
16 ensayos: 16 ensayos x 24 muestras
24 ensayos: 24 ensayos x 16 muestras
32 ensayos: 32 ensayos x 12 muestras
48 ensayos (horizontal): 48 ensayos x 8 muestras
48 ensayos (vertical normal): 48 ensayos x 8 muestras
64 ensayos: 64 ensayos x 6 muestras
96 ensayos: 96 ensayos x 4 muestras
128 ensayos: 128 ensayos x 3 muestras
192 ensayos: 192 ensayos x 2 muestras
384 ensayos: 384 ensayos x 1 muestra

Cantidad de placas solicitadas: Descuento (%)
1–5: 0
6–11: 15
12–23:30
24+: 50

qPCR basada en sonda de hidrólisis robusta y de alto rendimiento

Los paneles personalizados de PCR QuantiNova LNA Probe utilizan detección basada en sonda de hidrólisis marcada con FAM, que es altamente sensible y robusta, ya que solo detecta el producto de PCR deseado. La detección basada en sonda aún requiere una alta especificidad de PCR para evitar artefactos de amplificación, como productos de PCR inespecíficos y dímeros de cebadores, que pueden competir por los componentes de la reacción y comprometer el rendimiento. Sin embargo, ya hemos optimizado el sistema de PCR QuantiNova LNA Probe para que usted elimine la amplificación inespecífica y le brinde una detección precisa y sensible en todo momento.

La cobertura más completa y específica

Nuestro algoritmo patentado se ha utilizado para diseñar más de 1,3 millones de ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe, ofreciendo el análisis de ARNm y ARNlnc más sensible, preciso y eficaz. Los ensayos prediseñados abarcan la mayoría de las transcripciones de la base de datos Ensembl para genes humanos, murinos y de rata, lo que permite realizar estudios de expresión génica basados ​​en PCR con la mayor profundidad posible. La mayoría de los ensayos abarcan intrones cuando es posible y solo detectan ARN. Los ensayos que no abarcan un intrón se designan como tales, y si hay un exón en la diana, las señales no deseadas se pueden eliminar fácilmente utilizando el kit de transcripción inversa QuantiNova con el paso integrado de eliminación de ADNg.

Panel personalizado vs. panel flexible

Los paneles personalizados de PCR QuantiNova LNA Probe son un producto totalmente personalizable y están disponibles en formatos de placa de 96 pocillos, placa de 384 pocillos y disco de 100 pocillos, con todos nuestros diferentes diseños de placa disponibles. El generador de placas personalizado le permite cargar su propia lista de dianas y añadir cualquier ensayo prediseñado o personalizado que desee. También puede añadir cualquier gen de referencia, ensayo de control y controles.

Los paneles flexibles QuantiNova LNA Probe PCR son un producto semipersonalizable y están disponibles en formatos de placa de 96 pocillos, placa de 384 pocillos y disco de 100 pocillos, con hasta 96 ensayos diferentes en cada placa. Los paneles flexibles solo pueden contener ensayos de nuestros paneles Focus disponibles. Nuestro práctico creador de paneles personalizados le permite cargar fácilmente el contenido de la placa de un panel Focus existente e intercambiar los ensayos según sus necesidades. También se pueden añadir ensayos de genes de referencia y controles de nuestros paneles Focus.

Diseños de placas disponibles, cantidad mínima de pedido y descuento por placas múltiples

Ensayos de genes de referencia para cualquier estudio

Disponemos de una amplia selección de ensayos de genes de referencia humanos, murinos y de rata para permitir la normalización de datos de alta calidad y garantizar resultados fiables. Estos ensayos se centran en moléculas de ARN codificante endógeno, ARN largo no codificante y ARN nucleolar pequeño, que suelen expresarse constitutivamente en una amplia variedad de tejidos. Los ensayos de genes de referencia están marcados con FAM y han sido validados funcionalmente como genes de referencia para el sistema QuantiNova LNA PCR, y funcionan de forma óptima con los reactivos de RT y PCR de QuantiNova.

Normalización de los resultados de qPCR de ARNm/ARNlnc

La normalización elimina la variación técnica y biológica entre muestras no relacionada con los cambios biológicos investigados. Una normalización adecuada es fundamental para el análisis y la interpretación correctos de los resultados de los experimentos de PCR en tiempo real. Normalmente, se utilizan genes de referencia expresados ​​de forma estable para la normalización.

Generalmente, se recomienda probar varios genes de referencia de control endógenos candidatos antes de configurar el análisis de expresión de ARNm/ARNlnc. Estos candidatos deben seleccionarse entre genes que se espera que se expresen de forma estable en todo el espectro de muestras investigadas. Pueden ser ARNm o ARNlnc con expresión estable, seleccionados con base en la literatura o datos preexistentes (p. ej., análisis de panel mediante NGS o qPCR). El sistema QuantiNova LNA PCR ofrece ensayos de genes de referencia validados para ARN que tienden a expresarse de forma estable y, por lo tanto, son buenos candidatos como genes de referencia.

Todos los genes candidatos de referencia deben validarse empíricamente para cada estudio. Una opción para normalizar el panel de PCR al analizar un gran número de ARNm/ARNlnc es normalizarlo con respecto a la media global (el promedio de todos los ARNm/ARNlnc expresados). Esta opción puede ser adecuada en muestras con una alta tasa de expresión (genes expresados), pero debe utilizarse con precaución en muestras con una baja tasa de expresión. Tampoco es recomendable en muestras con un nivel general de expresión génica modificado. Puede encontrar más información sobre la normalización en el Centro de Análisis de Datos de GeneGlobe.

Análisis de datos complementarios

La herramienta de análisis de datos gratuita basada en la web del Centro de análisis de datos GeneGlobe incluye un asistente fácil de usar que lo guiará paso a paso a través de la normalización y el análisis de sus datos y genera cifras de resultados listas para publicar.

Procedimiento

- Ensayos de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Ensayos de referencia de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Ensayos personalizados de PCR con sonda LNA QuantiNova
- Paneles de enfoque de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Paneles de enfoque de lncRNA PCR de sonda LNA QuantiNova
- Paneles personalizados de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Paneles flexibles de PCR con sonda LNA QuantiNova

Elija qRT-PCR de uno o dos pasos

Los paneles personalizados de PCR con sonda QuantiNova LNA se han optimizado con la química QuantiNova de alto rendimiento y eficacia comprobada. Los mejores resultados se obtienen al realizar la transcripción inversa con el kit de transcripción inversa QuantiNova. El ADNc resultante se cuantifica mediante qPCR utilizando las mezclas maestras del kit de PCR con sonda QuantiNova junto con los ensayos de su panel.

Para la qRT-PCR de un solo paso, recomendamos el kit QuantiNova Probe RT-PCR, que ofrece una configuración rápida de la reacción sin necesidad de optimizar las condiciones. Simplemente combine la plantilla de ARN con la mezcla maestra de RT-PCR lista para usar y los ensayos de su panel e inicie la reacción.

Flujo de trabajo rápido y sencillo

El flujo de trabajo, rápido y sencillo, se completa en menos de 2 horas con un mínimo de intervención y se puede automatizar para ahorrar aún más tiempo y esfuerzo. La compatibilidad de este sencillo protocolo se ha comprobado en los termocicladores de qPCR de las principales marcas (véase la figura). Los ensayos de PCR con sonda LNA QuantiNova ofrecen un rendimiento uniforme en todos los termocicladores. Además, el ADNc generado en el paso de RT se puede utilizar en todo el sistema de PCR con sonda LNA QuantiNova, lo que permite una transición fluida de los ensayos a los paneles según las necesidades de su investigación, ahorrando tiempo y muestras.

Lo que necesita para comenzar a utilizar el sistema PCR QuantiNova LNA Probe

Transcripción inversa: Kit de transcripción inversa QuantiNova

Mezcla maestra para qPCR: Kit de PCR con sonda QuantiNova

qRT-PCR de un solo paso (opcional): Kit de RT-PCR con sonda QuantiNova

Ensayos o paneles:

Aplicaciones

- Análisis, perfilado y cuantificación de la expresión de ARNm y ARNlnc
- Validación de datos de expresión génica de RNA-seq
- Perfil de expresión genética
- Análisis de señales y vías
- Confirmación de la supresión de la expresión genética mediante LNA GapmeRs o siRNAs
- Desarrollo de biomarcadores, incluyendo detección, identificación y validación de biomarcadores asociados a enfermedades.
- Seguimiento de cambios fenotípicos relacionados con la expresión genética

Los ensayos y paneles de PCR de sonda LNA QuantiNova son muy adecuados para aplicaciones que incluyen: