Qiagen, 249995, Ensayo de PCR de sonda LNA QuantiNova (200)

Mezcla de cebador-sonda específica de ARNm/ARNlnc prediseñada en un solo tubo; suficiente para 200 reacciones utilizando qRT-PCR de 2 pasos o 100 reacciones utilizando qRT-PCR de 1 paso

Características

- Más de 1,3 millones de ensayos proporcionan la cobertura más amplia y mejor de transcripciones de ARNm y lncRNA de humanos, ratones y ratas en Ensemble.
- Sensibilidad y especificidad excepcionales utilizando cebadores cortos mejorados con LNA y sondas de hidrólisis marcadas con FAM
- Detección precisa en un amplio rango dinámico a partir de 1 copia de ARN
- Estabilidad para la configuración de temperatura ambiente que permite la automatización
- Resultados robustos y reproducibles en menos de 2 horas utilizando el kit PCR QuantiNova Probe

Detalles del producto

Los ensayos de PCR con sonda LNA QuantiNova proporcionan un análisis de expresión génica altamente robusto mediante detección con sonda de hidrólisis. Elija entre la más amplia selección de ensayos prediseñados para una detección precisa y sensible de cualquier ARNm o lncRNA humano, murino o de rata, desde la detección general de transcripciones hasta la diferenciación de isoformas específicas de transcripciones. La mejora de LNA nos permite diseñar cebadores y sondas más cortos, que se posicionan con mayor flexibilidad en la diana. Como resultado, podemos optimizar nuestros diseños para la detección de transcripciones específicas o la diferenciación de dianas. Además, la exhaustiva validación del diseño garantiza un rendimiento óptimo y una detección robusta, y los ensayos para todos los ARNm y lncRNA más comunes se someten a validación en laboratorio. Optimizado con la química de QuantiNova, el sencillo flujo de trabajo de PCR con sonda LNA QuantiNova se puede completar en menos de 2 horas y es lo suficientemente robusto como para permitir la configuración a temperatura ambiente, la automatización y la ejecución diferida de ensayos.

¿Necesita un presupuesto para su proyecto de investigación o desea hablar sobre él con nuestro equipo de especialistas? ¡Contáctenos!

Actuación

LNA mejora el rendimiento de qPCR

Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe se han desarrollado utilizando estrictos criterios de diseño y algoritmos validados en laboratorio. El riguroso proceso de selección de ensayos garantiza que cada conjunto de cebador-sonda ofrezca la máxima especificidad y eficiencia para obtener resultados fiables y precisos. La normalización de la Tm y la mejora de LNA confieren a los cebadores y la sonda una mayor afinidad de unión, lo que aumenta drásticamente la sensibilidad y especificidad del ensayo.

Esta mayor sensibilidad de los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe garantiza una excelente eficiencia de amplificación de hasta una molécula de ARN, lo que facilita la detección de dianas de baja abundancia, como lncRNA, a partir de menos material de partida (véase la figura). Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe proporcionan una cuantificación precisa, sensible y lineal de dianas en un amplio rango dinámico y la figura. Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe permiten la detección tanto de alta como de baja expresión de ARNm). La mayor especificidad gracias a la inteligente colocación de LNA proporciona una alta relación señal-ruido, lo que permite la discriminación de secuencias que difieren en un solo nucleótido y elimina la amplificación no específica y la formación de dímeros de cebadores.

La alta afinidad de unión de las bases de LNA aumenta la flexibilidad de la colocación de cebadores y sondas en el transcrito, lo que nos permite usar un posicionamiento inteligente para diseñar ensayos para dianas que de otro modo serían difíciles de analizar. Esto proporciona una mejor discriminación de dianas y una cuantificación robusta y fiable, incluso para dianas ricas en AU, transcripciones de baja abundancia, dianas con alta estructura secundaria y muestras de alta complejidad.

Optimizado con la química QuantiNova

Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe se desarrollaron para ofrecer resultados óptimos y la máxima reproducibilidad al utilizarse con nuestra química de PCR QuantiNova de confianza. Para la qRT-PCR de un solo paso, se incluye el kit QuantiNova Probe RT-PCR. Para la qRT-PCR de dos pasos, se incluyen el kit de transcripción inversa QuantiNova y el kit QuantiNova Probe PCR (véase la figura "Reproducibilidad lote a lote demostrada").

El mecanismo de arranque en caliente QuantiNova permite una qPCR exitosa, incluso con plantillas complejas, como aquellas con alto contenido de GC o estructura secundaria compleja, ideal para el análisis de lncRNA (véase la figura). Altas eficiencias constantes en todo el rango de contenido de GC esperado del transcriptoma humano. El arranque en caliente también permite la configuración de la reacción a temperatura ambiente y es lo suficientemente robusto como para soportar la configuración automatizada y el procesamiento diferido de placas de ensayo. Además, el indicador visual de color de pipeteo integrado ayuda a prevenir errores de pipeteo.

Confíe en los expertos en diseño de LNA

Veinte años de experiencia en el diseño de LNA nos han permitido desarrollar y optimizar nuestro sofisticado algoritmo de diseño de LNA, que incorpora más de 50 parámetros diferentes, todos ellos validados exhaustivamente en laboratorio según criterios de rendimiento muy estrictos, para garantizar el ensayo más óptimo para la detección exitosa de dianas. Hemos seleccionado hasta tres diseños de ensayo diferentes para cada transcripción y hemos validado completamente en laboratorio todos los ensayos de dianas de ARNm y lncRNA más populares. Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe simplemente funcionan, sin necesidad de invertir tiempo ni dinero en optimización.

Flujo de trabajo rápido y sencillo

El flujo de trabajo, rápido y sencillo, se completa en menos de 2 horas con un mínimo de intervención y se puede automatizar para ahorrar aún más tiempo y mano de obra. La compatibilidad de este sencillo protocolo se ha comprobado en los termocicladores de qPCR de las principales marcas (véase la figura). Los ensayos de PCR con sonda LNA QuantiNova ofrecen un rendimiento uniforme en todos los termocicladores. Además, el ADNc generado en el paso de RT se puede utilizar en todo el sistema de PCR con sonda LNA QuantiNova, lo que permite una transición fluida de los ensayos a los paneles según las necesidades de su investigación, ahorrando tiempo y muestras.

Principio

Ensayos de cobertura genética: ensayos específicos de transcripción
Ensayo recomendado por QIAGEN: Marcado como “Mejor cobertura”
Descripción del diseño y cobertura del ensayo: Cubre la mayoría de las transcripciones biológicamente relevantes del gen dado.
Cuándo elegir: Para la detección general de transcripciones y para determinar si el gen de interés se expresa en una muestra; para la detección de tantas transcripciones e isoformas de un gen como sea posible

- Mejor cobertura: para detección de transcripciones generales
- Mejor ensayo de transcripción: para la detección de una transcripción específica
- Mejor ensayo específico de transcripción: para la diferenciación entre isoformas de transcripción específicas

Detección basada en sonda de hidrólisis robusta y de alto rendimiento

Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe utilizan detección basada en sonda de hidrólisis marcada con FAM, que es altamente sensible y robusta, ya que solo detecta el producto de PCR deseado. La detección basada en sonda aún requiere una alta especificidad de PCR para evitar artefactos de amplificación, como productos de PCR inespecíficos y dímeros de cebadores, que pueden competir por los componentes de la reacción y comprometer el rendimiento. Sin embargo, ya hemos optimizado el sistema de PCR QuantiNova LNA Probe para que usted elimine la amplificación inespecífica y le brinde una detección precisa y sensible en todo momento.

La cobertura más completa y específica

Nuestro algoritmo patentado se ha utilizado para diseñar más de 1,3 millones de ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe, ofreciendo el análisis de ARNm y ARNlnc más sensible, preciso y eficaz. Los ensayos prediseñados abarcan la mayoría de las transcripciones de la base de datos Ensembl para genes humanos, murinos y de rata, lo que permite realizar estudios de expresión génica basados ​​en PCR con la mayor profundidad posible. La mayoría de los ensayos abarcan intrones cuando es posible y solo detectan ARN. Los ensayos que no abarcan un intrón se designan como tales, y si hay un exón en la diana, las señales no deseadas se pueden eliminar fácilmente utilizando el kit de transcripción inversa QuantiNova con el paso integrado de eliminación de ADNg.

Cómo elegir el ensayo adecuado para su objetivo

Los ensayos de PCR de sonda LNA QuantiNova prediseñados le permiten detectar con precisión y sensibilidad cualquier ARNm o lncRNA humano, de ratón o de rata, sin importar el nivel de análisis que necesite: detección de transcripción general, detección de una transcripción específica o diferenciación de isoformas de transcripción.

La mayoría de los genes humanos, de ratón y de rata tienen una sola transcripción, pero para aquellos con múltiples transcripciones, seleccionamos hasta tres ensayos por transcripción utilizando el mismo algoritmo. El diseño y la posición de los cebadores de estos ensayos difieren para adaptarse a los diversos requisitos de uso. Nuestra guía de selección de ensayos le ayuda a identificar rápidamente el mejor ensayo de cada categoría. Después de buscar ensayos para su diana, simplemente revise los resultados y busque el ensayo recomendado que se ajuste a su uso previsto:

Consulte la tabla a continuación para obtener más detalles.

Análisis de datos complementarios

La herramienta de análisis de datos gratuita basada en la web del Centro de análisis de datos GeneGlobe incluye un asistente fácil de usar que lo guiará paso a paso a través de la normalización y el análisis de sus datos y genera cifras de resultados listas para publicar.

Ensayos de genes de referencia para cualquier estudio

Disponemos de una amplia selección de ensayos de genes de referencia humanos, murinos y de rata para permitir la normalización de datos de alta calidad y garantizar resultados fiables. Estos ensayos se centran en moléculas de ARN codificante endógeno, ARN largo no codificante y ARN nucleolar pequeño, que suelen expresarse constitutivamente en una amplia variedad de tejidos. Los ensayos de genes de referencia están marcados con FAM y han sido validados funcionalmente como genes de referencia para el sistema QuantiNova LNA PCR, y funcionan de forma óptima con los reactivos de RT y PCR de QuantiNova.

Normalización de los resultados de qPCR de ARNm/ARNlnc

La normalización elimina la variación técnica y biológica entre muestras no relacionada con los cambios biológicos investigados. Una normalización adecuada es fundamental para el análisis y la interpretación correctos de los resultados de los experimentos de PCR en tiempo real. Normalmente, se utilizan genes de referencia expresados ​​de forma estable para la normalización.

Generalmente, se recomienda probar varios genes de referencia de control endógenos candidatos antes de configurar el análisis de expresión de ARNm/ARNlnc. Estos candidatos deben seleccionarse entre genes que se espera que se expresen de forma estable en todo el espectro de muestras investigadas. Pueden ser ARNm o ARNlnc con expresión estable, seleccionados según la literatura o datos preexistentes (p. ej., análisis de panel mediante NGS o qPCR). El sistema QuantiNova LNA PCR ofrece ensayos de genes de referencia validados para ARN que tienden a expresarse de forma estable y, por lo tanto, son buenos candidatos como genes de referencia.

Todos los genes candidatos de referencia deben validarse empíricamente para cada estudio. Una opción para normalizar el panel de PCR al analizar un gran número de ARNm/ARNlnc es normalizarlo con respecto a la media global (el promedio de todos los ARNm/ARNlnc expresados). Esta opción puede ser adecuada en muestras con una alta tasa de expresión (genes expresados), pero debe utilizarse con precaución en muestras con una baja tasa de expresión. Tampoco es recomendable en muestras con un nivel general de expresión génica modificado. Puede encontrar más información sobre la normalización en el Centro de Análisis de Datos de GeneGlobe.

Procedimiento

- Ensayos de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Ensayos de referencia de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Ensayos personalizados de PCR con sonda LNA QuantiNova
- Paneles de enfoque de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Paneles de enfoque de lncRNA PCR de sonda LNA QuantiNova
- Paneles personalizados de PCR de sonda LNA QuantiNova
- Paneles flexibles de PCR con sonda LNA QuantiNova

Elija qRT-PCR de uno o dos pasos

Los ensayos de PCR QuantiNova LNA Probe se han optimizado con la química QuantiNova de alto rendimiento y eficacia comprobada. Los mejores resultados se obtienen al realizar la transcripción inversa con el kit de transcripción inversa QuantiNova. El ADNc resultante se cuantifica mediante qPCR utilizando las mezclas maestras del kit QuantiNova Probe PCR junto con el ensayo de PCR QuantiNova LNA Probe de su elección.

Para la qRT-PCR de un solo paso, recomendamos el kit QuantiNova Probe RT-PCR, que permite una rápida configuración de la reacción sin necesidad de optimizar las condiciones. Simplemente añada los cebadores, la sonda y el molde de ARN a la mezcla maestra de RT-PCR lista para usar e inicie la reacción.

Envío y entrega

Los ensayos PCR QuantiNova LNA Probe se envían en hielo seco. Los ensayos disponibles se entregan en un plazo de 1 a 5 días. Durante el periodo de acceso anticipado, se esperan plazos de entrega más largos.

Lo que necesita para comenzar a utilizar el sistema PCR QuantiNova LNA Probe

Transcripción inversa: Kit de transcripción inversa QuantiNova

Mezcla maestra para qPCR: Kit de PCR con sonda QuantiNova

qRT-PCR de un solo paso (opcional): Kit de RT-PCR con sonda QuantiNova

Ensayos o paneles:

Aplicaciones

- Análisis, perfilado y cuantificación de la expresión de ARNm y ARNlnc
- Validación de datos de expresión génica de RNA-seq
- Perfil de expresión genética
- Análisis de señales y vías
- Confirmación de la supresión de la expresión genética mediante LNA GapmeRs o siRNAs
- Desarrollo de biomarcadores, incluyendo detección, identificación y validación de biomarcadores asociados a enfermedades.
- Seguimiento de cambios fenotípicos relacionados con la expresión genética

Los ensayos de PCR de sonda LNA QuantiNova son muy adecuados para aplicaciones que incluyen: