Qiagen, 250131, Kit de sonda avanzada QIAcuity OneStep (1 ml)

1 ml de OneStep Advanced Probe Master Mix (4x), 45 µl de OneStep RT Mix (100x), 1 ml Enhancer GC, 20 µl de QN Internal Control RNA, 2 x 1,9 ml de agua sin ARNasa; para 100 reacciones en Nanoplate 26K y 333 reacciones en Nanoplate 8.5K

Características

- Función HotStart RT que permite la configuración simultánea de nanoplacas para QIAcuity Four y Eight
- Configuración de la reacción a temperatura ambiente gracias a la función HotStart RT
- Para reacciones singleplex y multiplex
- Mezcla maestra de PCR concentrada 4x para cargar más muestras
- Robustez avanzada contra inhibidores

Detalles del producto

El kit QIAcuity OneStep Advanced Probe PCR permite la cuantificación sensible de dianas de ARN o ARN+ADN en el instrumento de PCR digital QIAcuity mediante una reacción de RT-PCR combinada. Contiene una mezcla maestra 4x concentrada y una mezcla RT 100x concentrada, optimizada para su uso en microfluidos en las nanoplacas QIAcuity. El kit mejora la especificidad y la eficiencia de la PCR digital basada en sonda para proporcionar un análisis preciso, ya sea de un solo plexo o de hasta 5 plexos.

El nuevo kit está equipado con una enzima de transcripción inversa (RT) HotStart, que permite la configuración de la reacción a temperatura ambiente y la configuración simultánea de Nanoplate para cargar en los instrumentos QIAcuity Four u Eight.

El kit funciona en conjunto con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity.

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Actuación

RT estándar: HotStart RT
sin Enhancer GC: con Enhancer GC
Ensayos ABI TaqMan: ATOX1
TGFBR2: 100%

Rendimiento avanzado de transcripción inversa

La nueva mezcla de transcripción inversa avanzada QIAcuity incluye la nueva tecnología de transcripción inversa HotStart de QIAGEN, pendiente de patente. La nueva enzima HotStart RT no es funcional a temperatura ambiente y evita la generación de ADNc fuera del objetivo, incluso cuando se deja incubar a 37 °C durante muchas horas (véase la figura Análisis de la curva de fusión de la nueva HotStart RT). Por lo tanto, permite una configuración de reacción a temperatura ambiente. La enzima HotStart RT permite a los usuarios ensamblar sus reacciones a temperatura ambiente. Además, y más importante aún, la enzima HotStart RT permite a los usuarios ensamblar y cargar múltiples nanoplacas en paralelo sin tener que preocuparse por la actividad de RT no deseada y potencialmente inespecífica mientras las placas esperan a temperatura ambiente. La enzima HotStart RT se bloquea mientras las nanoplacas permanecen y esperan dentro del instrumento QIAcuity hasta que se transfieren al termociclador, donde tiene lugar el paso de RT del protocolo.

Enhancer GC mejora el rendimiento de ensayos específicos

El rendimiento del ensayo de dPCR depende de las secuencias y el diseño del cebador y las sondas. El contenido de GC y la longitud del amplicón varían según el catálogo industrial y los ensayos personalizados. Las químicas de PCR están optimizadas para un uso universal y un rendimiento óptimo; sin embargo, a veces se recomienda añadir potenciadores específicos. El nuevo Enhancer GC es un componente opcional (vial independiente) que se puede añadir a la reacción de dPCR cuando los amplicones son ricos en GC o tienen una longitud superior a 150 nt. También se recomienda su uso con ensayos de expresión génica TaqMan (Thermo Fisher).

Tabla: Eficiencia de RT con y sin Enhancer GC

Rendimiento de amplificación superior

El kit de sondas QIAcuity OneStep Advanced para dPCR basada en sonda de hidrólisis utiliza la última versión de la ADN polimerasa de alta calidad de QIAGEN. La combinación única de la tecnología de tampón patentada y de eficacia probada de QIAGEN, optimizada para la microfluídica Nanoplate, junto con la nueva ADN polimerasa QuantiNova, ofrece resultados altamente consistentes en términos de sensibilidad, reproducibilidad y eficiencia.

ARN de control interno

El kit de sonda QIAcuity OneStep Advanced incluye un ARN de control interno QuantiNova (ARN QN IC), que puede utilizarse opcionalmente como control de transcripción inversa y amplificación. El ensayo de sonda QuantiNova IC (200) (n.º de cat. 205813), disponible por separado, detecta el ARN de control interno QuantiNova sobre un amplicón de 200 pb en el canal amarillo del instrumento QIAcuity. Las secuencias de cebador y sonda para la detección del ARN QuantiNova IC se han validado bioinformáticamente para detectar la no homología frente a cientos de organismos eucariotas y procariotas. Además, se han probado experimentalmente frente a una gran cantidad de muestras de ARN humano, murino y de rata de diversos tejidos y líneas celulares.

NOTA: Los usuarios no deben comprar la sonda de ensayo QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500) (n.° de cat. 205824), ya que no está optimizada para funcionar con QIAcuity.

Principio

El kit de sondas QIAcuity OneStep Advanced contiene una mezcla maestra de PCR 4x lista para usar, lo que elimina la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. La química OneStep permite la RT y la amplificación del ARN viral de interés en un solo paso. En la reacción OneStep, también se pueden detectar dianas de ARN y ADN juntas, por ejemplo, ARN viral con ADN bacteriano.

Aquí se describe el principio de la reacción dPCR en las nanoplacas.

Procedimiento

El kit de sondas QIAcuity OneStep Advanced contiene una mezcla maestra de PCR 4x lista para usar, lo que elimina la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Simplemente añada la mezcla RT 100x, el ARN molde y los conjuntos de cebador-sonda a la mezcla maestra y siga el procedimiento descrito en el Protocolo de inicio rápido para obtener resultados rápidos y fiables en el QIAcuity. Con la nueva enzima HotStart RT, es posible configurar en paralelo y cargar simultáneamente varias nanoplacas en los instrumentos QIAcuity Four y Eight (véase la figura "Configuración y carga de nanoplacas").

Aplicaciones

El kit de sondas QIAcuity OneStep Advanced, combinado con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity, permite el análisis cuantitativo de dianas de ARN para diversas aplicaciones, como la detección de ARN viral o ARNm. También son posibles las aplicaciones que requieren la detección simultánea de dianas de ARN y ADN, por ejemplo, en el análisis de aguas residuales.