Qiagen, 250134, Kit de PCR de sonda multiplexada QIAcuity High (5 ml)

5 x 1 ml de mezcla maestra de PCR de sonda QIAcuity High Multiplex concentrada 4x, 8 x 1,9 ml de agua sin ARNasa, ADN de control interno QN

Características

- Para multiplexación superior a 5-plex, incluida multiplexación de amplitud de hasta 12-plex
- Mezcla maestra concentrada 4x que permite cargar más muestra
- Optimizado para uso microfluídico en nanoplacas QIAcuity
- Kit conforme con REACH

Detalles del producto

El kit de PCR con sonda QIAcuity High Multiplex contiene una mezcla maestra 4x concentrada, lista para usar y optimizada para su uso en microfluidos en las nanoplacas QIAcuity. El kit mejora la especificidad y la eficiencia de la PCR digital basada en sonda para proporcionar un análisis preciso de un solo plexo o de hasta 12 plexos. Puede configurar reacciones de 8 plexos utilizando seis canales QIAcuity (un ensayo por canal) más dos colorantes de desplazamiento de Stokes largo (LSS). Para el análisis de hasta 12 dianas, puede realizar multiplexación de amplitud mezclando dos ensayos diferentes por canal.

La mezcla maestra de sondas QIAcuity High Multiplex está optimizada para aumentar la especificidad para una cuantificación precisa de gDNA o cDNA en los instrumentos dPCR QIAcuity.

El kit funciona junto con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity.

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Actuación

La plataforma de PCR digital QIAcuity supera los desafíos de la PCR multiplexada de alta frecuencia, en parte gracias a la matriz de diafonía personalizada del software QIAcuity 3.0. Esta nueva función del software compensa la diafonía óptica, o superposición de señales, entre canales adyacentes. Junto con la química especializada del kit de PCR de sonda multiplexada de alta frecuencia QIAcuity, los usuarios pueden detectar dianas en hasta ocho canales: seis canales ópticos estándar y dos canales híbridos que utilizan sondas de hidrólisis con colorantes de desplazamiento largo de Stokes (LSS) (Figura 1).

El software QIAcuity 3.1 y el kit de PCR de sonda multiplexada alta QIAcuity permiten a los usuarios detectar hasta 12 objetivos en seis canales (Figura 2 y Figura 3).

Principio

Gracias a un novedoso mecanismo de inicio en caliente mediado por anticuerpos, el kit de PCR QIAcuity High Multiplex Probe ofrece análisis de ADNc o ADNg, tanto singleplex como multiplex, con la máxima especificidad. A bajas temperaturas, la ADN polimerasa QuantiNova se mantiene inactiva gracias al anticuerpo QuantiNova y a un novedoso aditivo, QuantiNova Guard, que estabiliza el complejo. Esto mejora la rigurosidad del inicio en caliente y previene la extensión de cebadores y dímeros de cebadores annealed inespecíficamente. A los 2 minutos de alcanzar la temperatura de 95 °C, el anticuerpo QuantiNova y QuantiNova Guard se desnaturalizan y la ADN polimerasa QuantiNova se activa, lo que permite la amplificación por PCR.

Aquí se describe el principio de la reacción dPCR en las nanoplacas.

Procedimiento

El kit de sondas QIAcuity High Multiplex contiene una mezcla maestra de PCR 4x lista para usar, lo que elimina la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Simplemente añada el ADN molde y los conjuntos de cebador-sonda a la mezcla maestra y siga el procedimiento descrito en el protocolo de inicio rápido para obtener resultados rápidos y fiables con el QIAcuity.

El sistema integra particionamiento, termociclado e imágenes en un único instrumento totalmente automatizado que permite a los usuarios obtener el resultado de la muestra en menos de dos horas. Analice sus resultados con el paquete de software, donde podrá determinar la concentración de su secuencia objetivo en copias por microlitro y obtener datos sobre muestras positivas o NTC para control de calidad. Este análisis puede extenderse a computadoras remotas dentro de la misma red de área local (LAN) para mayor comodidad.

Aplicaciones

- Detección de mutaciones raras
- Análisis de la variación del número de copias
- Investigación microbiana, incluido el monitoreo de aguas residuales
- Detección de patógenos
- Genotipado
- Análisis de la expresión genética
- Investigación de miRNA

El kit de PCR de sonda multiplexada alta QIAcuity, en combinación con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity, permite el análisis cuantitativo de objetivos de ADNc y ADNg para su uso en aplicaciones que incluyen: