Qiagen, 250142, Kit de EG avanzado QIAcuity OneStep (5 ml)

OneStep Advanced EG Master Mix (4x), OneStep RT Mix (100x), 20 µl de solución QN de ARN de control interno, agua sin ARNasa; para 500 reacciones en Nanoplate 26k y 1666 reacciones en Nanoplate 8.5k

Características

- Para reacciones de PCR digital RT basadas en colorante utilizando EvaGreen
- Función HotStart RT que permite la configuración simultánea de nanoplacas para QIAcuity Four y Eight
- Configuración de la reacción a temperatura ambiente gracias a la función HotStart RT
- Mezcla maestra de PCR concentrada 4x para cargar más muestras

Detalles del producto

El kit QIAcuity OneStep Advanced EG PCR permite la cuantificación sensible de dianas de ARN o ARN+ADN en una reacción combinada de RT-PCR en el sistema de PCR digital QIAcuity. El kit contiene una mezcla maestra 4x concentrada y una mezcla RT 100x concentrada, optimizada para su uso en microfluidos en las nanoplacas QIAcuity. El kit mejora la especificidad y la eficiencia de la PCR digital basada en colorantes para proporcionar un análisis de cuantificación preciso. Como colorante intercalante, EvaGreen se une al ADN bicatenario y mejora la precisión cuantitativa de las mediciones de ADNg o ADNc en los instrumentos QIAcuity dPCR.

El nuevo kit incluye una enzima de transcripción inversa (RT) HotStart. Gracias a esta enzima, puede trabajar a temperatura ambiente para preparar simultáneamente la reacción y la nanoplaca para su carga en los instrumentos QIAcuity Four u Eight.

El kit funciona en combinación con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity. ¿Desea obtener más información sobre el producto con uno de nuestros especialistas en dPCR? Inicie sesión aquí y nos pondremos en contacto con usted en breve.

Actuación

Rendimiento avanzado de transcripción inversa

La nueva mezcla de transcripción inversa avanzada QIAcuity incluye la nueva tecnología de transcripción inversa HotStart, pendiente de patente. La nueva enzima HotStart RT no funciona a temperatura ambiente y previene la generación de ADNc no deseado, incluso incubando a 37 °C durante varias horas. Con esta enzima, puede configurar sus reacciones a temperatura ambiente. Cabe destacar que, con la enzima HotStart RT, puede ensamblar y cargar múltiples nanoplacas en paralelo, a temperatura ambiente, sin riesgo de actividad de RT no deseada y potencialmente inespecífica. La enzima HotStart RT se bloquea mientras las nanoplacas permanecen dentro del instrumento QIAcuity antes de transferirlas al termociclador, donde se lleva a cabo el paso de RT del protocolo.

Detección basada en colorantes con EvaGreen

La mezcla maestra especial del kit QIAcuity OneStep EG PCR permite la amplificación y cuantificación precisa de ADN bicatenario diana. El kit incluye un colorante de referencia optimizado, necesario para el recuento de particiones analizables en nanoplacas y el análisis de dPCR. Además, EvaGreen proporciona una señal de fluorescencia más alta que SYBR Green a las mismas concentraciones y ofrece la máxima eficiencia de amplificación, especificidad y sensibilidad en dPCR.

Principio

El kit QIAcuity OneStep Advanced EG contiene una mezcla maestra de PCR 4x lista para usar, lo que elimina la necesidad de optimizar las condiciones de reacción y ciclado. Con la química OneStep, puede realizar la RT y la amplificación del ARN viral de interés en un solo paso. En la reacción OneStep, también se pueden detectar dianas de ARN y ADN juntas, por ejemplo, ARN viral con ADN bacteriano.

Aquí se describe el principio de la reacción dPCR en las nanoplacas.

Procedimiento

El kit QIAcuity OneStep Advanced EG contiene una mezcla maestra de PCR 4x lista para usar, por lo que no es necesario optimizar las condiciones de reacción ni de ciclado. Simplemente añada la mezcla RT 100x, el ARN molde y los conjuntos de cebadores y sondas a la mezcla maestra y siga el procedimiento descrito en el protocolo de inicio rápido para obtener resultados rápidos y fiables en el sistema de PCR digital QIAcuity. Con la nueva enzima HotStart RT, es posible configurar en paralelo y cargar simultáneamente varias nanoplacas en los instrumentos QIAcuity Four y Eight (véase la figura "Configuración y carga de nanoplacas").

Aplicaciones

El kit de sondas QIAcuity OneStep Advanced, combinado con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity, permite el análisis cuantitativo de dianas de ARN para diversas aplicaciones, como la detección de ARN viral o ARNm. También son posibles las aplicaciones que requieren la detección simultánea de dianas de ARN y ADN, por ejemplo, en el análisis de aguas residuales.