Qiagen, 250200, ensayo de mutación de LNA por dPCR (200)

Tubo único que contiene un ensayo concentrado 30x listo para usar con opción de colorantes de detección FAM + HEX o Atto 550 + ROX; suficiente para 200 reacciones de dPCR de 40 µl cada una

Características

- El diseño del ensayo dúplex detecta secuencias mutadas y de tipo salvaje
- Elección de combinaciones de colorantes fluorescentes FAM + HEX o Atto 550 + ROX
- Los cebadores y sondas mejorados con LNA aumentan la especificidad y la sensibilidad del ensayo.
- Ensayos dPCR probados en laboratorio húmedo disponibles para más de 200 objetivos
- Adecuado para su uso con ADN tumoral circulante, biopsia líquida, FFPE y otras muestras de tejido.
- Diseñado para su uso con QIAcuity MasterMix

Detalles del producto

Los ensayos de mutación de LNA mediante dPCR permiten la detección de mutaciones de secuencias individuales seleccionadas de bases de datos exhaustivas y seleccionadas, como COSMIC. Los diseños de los ensayos se han probado mediante dPCR en laboratorio y los datos resultantes están disponibles. La sensibilidad para detectar la mutación diana es del 0,1 % en un fondo de tipo silvestre en un pocillo de una nanoplaca QIAcuity. Se puede lograr una sensibilidad aún mayor dividiendo la reacción en varios pocillos y combinando los análisis. La elección de dos combinaciones de colorantes fluorescentes permite la detección de secuencias mutantes y de tipo silvestre, así como el análisis multiplexado de dos mutaciones diana en un solo pocillo.

Los ensayos están disponibles en formato de tubo como un ensayo listo para usar, concentrado 30x, que consta de dos cebadores y sondas para mutantes y tipos salvajes. Los ensayos de mutación de LNA dPCR se deben utilizar con QIAcuity MasterMix.

Actuación

La dPCR permite una mayor sensibilidad en la detección y cuantificación absoluta de eventos raros/variantes de secuencia, lo que permite detectar la presencia de una mutación al 0,1 % en un fondo de ADN genómico de tipo silvestre. La partición permite aumentar la concentración específica de la diana. La amplificación y detección de punto final sobre el ruido, con una selección binaria de diana positiva/negativa, permite una cuantificación precisa, independiente del rendimiento de la amplificación (debido, por ejemplo, a inhibidores de la PCR).

Principio

Los ensayos de mutación de LNA por dPCR son ensayos dúplex basados ​​en sondas de hidrólisis que identifican la presencia de secuencias de mutación específicas. Una sonda detecta el alelo mutante y la otra, el alelo silvestre. La PCR digital proporciona el método más sensible y fiable para detectar una secuencia de ADN mutante en un fondo silvestre. Los ensayos de mutación de LNA por dPCR utilizan cebadores y sondas mejorados con LNA, lo que aumenta la especificidad y la sensibilidad del ensayo, permitiendo detectar una mutación presente al 0,1 % en un fondo de ADN genómico silvestre en un solo pocillo de la nanoplaca.

Dos opciones de detección de fluorescencia permiten el análisis multiplex de dos dianas de mutación en un solo pocillo. Durante la configuración del producto, se puede elegir entre FAM + HEX o Atto 550 + ROX para detectar mutantes y tipos salvajes.

Procedimiento

Para configurar el experimento de dPCR, añada una alícuota de la muestra de ADN genómico (aislada de muestras frescas, congeladas o fijadas) a la QIAcuity MasterMix y al ensayo de PCR de mutación de LNA dPCR. Cada reacción se analiza en uno o varios pocillos de una QIAcuity Nanoplate.

Tras cargar y sellar la nanoplaca, seleccione el programa de ciclado recomendado en el instrumento QIAcuity. En el análisis de cuantificación absoluta del paquete de software QIAcuity, se muestra el resultado de copias por microlitro. La abundancia fraccional calculada de la diana mutante y los datos correspondientes están disponibles en el análisis de mutación.

Aplicaciones

Los ensayos de PCR de mutación de LNA dPCR son muy adecuados para identificar de forma rápida y precisa mutaciones de secuencias específicas individuales presentes en el ADN de muestras frescas, congeladas o fijadas.