Qiagen, 250206, ensayo de número de copias de dPCR (1000)

Tubo único que contiene un ensayo concentrado 25x listo para usar; suficiente para 1000 reacciones de dPCR de 12 µl cada una

Características

- Ensayos prediseñados para todos los genes del genoma humano
- Elección de 3 ubicaciones de diseño por gen: 5', medio y 3'
- Aún más ensayos prediseñados disponibles a pedido
- Se han realizado pruebas de laboratorio mediante dPCR para más de 200 objetivos.
- Formato simple y directo para el uso de dPCR
- Cómodo análisis de datos de número de copias mediante el paquete de software QIAcuity

Detalles del producto

Los ensayos de número de copias por dPCR permiten un análisis específico, preciso, reproducible y fácil de interpretar del cambio en el número de copias de un gen o región de interés. Se han realizado ensayos de dPCR para más de 200 dianas en laboratorio. Todos los demás diseños in silico se han verificado en laboratorio y están listos para su uso en estudios de seguimiento de NGS, cribado de dianas específicas y otros estudios relacionados.

Los ensayos de número de copias de dPCR están disponibles en formato de tubo, listos para usar y con una concentración 25x. El tubo contiene el par de cebadores para usar con el kit QIAcuity EG PCR y el instrumento QIAcuity. Los ensayos de dPCR probados en laboratorio se identifican como tales en la vista del producto del ensayo.

Actuación

La verificación de laboratorio de la calidad de los ensayos garantiza que los ensayos de PCR de número de copias por dPCR ofrezcan resultados fiables. El análisis del número de copias mediante PCR digital permite identificar con precisión la aneuploidía en líneas celulares que contienen aberraciones cromosómicas previamente identificadas mediante métodos citogenéticos. La PCR digital puede detectar cambios en el número de copias de tan solo 1,2 veces o de 5 a 6 copias. La partición de la reacción de dPCR es el factor clave que permite el nivel de discriminación necesario para resolver cambios tan pequeños.

Para la normalización, también están disponibles ensayos de referencia correspondientes a diferentes números de copias por genoma humano.

Principio

Todos los ensayos de PCR de número de copias dPCR están diseñados para regiones específicas del genoma humano. Los ensayos de referencia de número de copias dPCR (disponibles por separado) incluyen diversas referencias con diferentes números de copias en el genoma, lo que permite seleccionar las referencias de normalización óptimas para cada análisis. Recomendamos incluir dos ensayos de referencia para calcular con precisión el número de copias del gen o diana de interés.

Los ensayos de número de copias de dPCR están listos para usar: simplemente añada la muestra de ADN y la mezcla maestra del kit QIAcuity EG PCR a los ensayos individuales o de referencia en la nanoplaca QIAcuity. La detección se basa en el colorante intercalante EvaGreen.

Aquí se describe el principio de la reacción dPCR en las nanoplacas.

Procedimiento

Para configurar el experimento de dPCR, añada una alícuota de la muestra de ADN genómico (aislada de muestras frescas, congeladas o fijadas) a la mezcla maestra del kit QIAcuity EG PCR y al ensayo de número de copias de dPCR. Cada gen o diana de interés y cada ensayo de referencia se analizan en su propio pocillo.

Tras cargar y sellar la nanoplaca, procese la placa con el programa de ciclado recomendado en el instrumento QIAcuity. Las copias por microlitro resultantes se muestran en el tipo de análisis de cuantificación absoluta del paquete de software QIAcuity. Para calcular el número de copias por genoma, seleccione el tipo de análisis de datos de número de copias en el paquete de software QIAcuity y defina los pocillos de la nanoplaca para el gen/región de interés o la referencia de normalización.

Aplicaciones

Los ensayos de número de copias dPCR son muy adecuados para detectar con precisión alteraciones o variaciones en el número de copias en loci individuales utilizando ADN de muestras frescas, congeladas o fijadas.