Qiagen, 250220, Kit cuantitativo de resDNA de E. coli QIAcuity (96)

Para 96 ​​reacciones: QIAcuity E.coli resDNA Quant Mastermix (2x) 500 µl x 4, 1x Control positivo, 1x Control interno, 3x Agua libre de ARNasa

Características

- Mezcla maestra premezclada con controles para una fácil configuración y detección del ADN de la célula huésped
- Permite la detección precisa de ADN residual de células huésped de E. coli, CHO y HEK293 hasta niveles bajos de femtogramos.
- Un ensayo de objetivo de múltiples copias que detecta y cuantifica el ADN de la célula huésped altamente fragmentado
- Permite la detección de ADN de la célula huésped tanto en muestras extraídas como no extraídas.

Detalles del producto

La contaminación del ADN de células huésped en productos como vacunas, fármacos y otros productos biofarmacéuticos supone grandes riesgos para la salud. Por lo tanto, sus límites de seguridad están estrictamente regulados por agencias como la FDA de EE. UU. y la OMS. Se establecen directrices claras para los límites máximos de ADN residual en función de la naturaleza de la administración del fármaco, la infectividad y la oncogenicidad del ADN celular contaminante. Por ejemplo, la administración parenteral de ADN celular no tumorígeno debe limitarse a 10 ng/dosis y una longitud máxima de 200 pb, mientras que la OMS recomienda menos de 100 µg/dosis de ADN residual para las vacunas administradas por vía oral.

La detección y eliminación de dichas contaminaciones en productos manufacturados requiere mediciones altamente sensibles y precisas de las cantidades extremadamente bajas de ADN de células huésped específicas presentes en los productos.

La PCR digital es el método de detección preferido para la cuantificación de ADN residual. Esto se debe a su inigualable sensibilidad y precisión, especialmente con niveles traza de contaminación, en comparación con otros métodos de detección como la qPCR. Los kits de cuantificación de ADN residual QIAcuity permiten la detección precisa y precisa de ADN de células huésped de Escherichia coli (E. coli), células de ovario de hámster chino (CHO) y células de riñón embrionario humano 293 (HEK293).

Actuación

Ensayo: Número de copias objetivo
Kit cuantitativo de resDNA de E. coli QIAcuity: 7
Kit QIAcuity CHO resDNA Quant: ~ 1 millón, indefinido (elemento repetido)
Kit cuantitativo de resDNA QIAcuity HEK293: ~ 1 millón, indefinido (elemento repetido)

Cantidad de carga por reacción (fg/rxn): Estándar de E. coli (copias/µl)
50000: 2949.7
5000: 291,6
500: 27.6
50: 2.8
25: 1.46
5: 0,45
NTC: 0

Cantidad de carga por reacción (fg/rxn): Estándar CHO (copias/µl)
50000: 4939.3
5000: 508.3
500: 50.2
50: 4.7
25: 2.6
5: 0.6
NTC: 0

Cantidad de carga por reacción (fg/rxn): Estándar HEK293 (copias/µl)
50000: 1104.9
5000: 104.5
500: 8.83
50: 0,99
NTC: 0

Los kits de cuantificación de ADN residual QIAcuity proporcionan resultados precisos de cuantificación de ADN residual (resDNA) de CHO, E. coli y HEK293, con o sin extracción, incluso en presencia de contaminantes de PCR u otros reactivos inhibidores. Estos ensayos son diana multicopia que determinan con precisión el ADN residual altamente fragmentado de la célula huésped.

El kit QIAcuity E.coli resDNA Quant detecta tan solo 5 fg de ADN residual en una sola reacción

*Se esperan 100 copias/µl para el control interno

La PCR digital proporciona una mayor sensibilidad de detección en un rango de entrada de plantilla más bajo en comparación con la qPCR y, por lo tanto, permite una aplicación más sólida.

El kit QIAcuity CHO resDNA Quant detecta tan solo 5 fg de ADN residual en una sola reacción

El kit QIAcuity HEK293 resDNA Quant detecta tan solo 5 fg de ADN residual en una sola reacción

Los kits funcionan en conjunto con el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity, ofreciendo un flujo de trabajo de dPCR completo y rápido, comparable al de qPCR, pero con una cuantificación absoluta del resDNA en la muestra. Los kits se han diseñado teniendo en cuenta los requisitos de la fabricación de bioprocesos y el control de calidad.

Principio

Aquí se describe el principio de la reacción dPCR en las nanoplacas.

El uso de la PCR digital QIAcuity para la monitorización del ADN de células huésped mejora el LOD/LOQ mediante la partición de la muestra a granel con la ayuda de QIAcuity Nanoplate 26k. La partición aumenta la concentración efectiva del objetivo, lo que permite capturar y medir una pequeña cantidad de ADN de células huésped con mayor exactitud y precisión. La capacidad de cargar grandes cantidades de plantilla en QIAcuity Nanoplate 26k, junto con un mayor número de particiones, es una de las razones de la mayor exactitud y precisión en la detección de células huésped residuales.

Procedimiento

El lisado se añade al ensayo cuantitativo residual junto con el control interno y el ADN de la célula huésped, medido mediante cuantificación absoluta. Las copias/µl se convierten a fg/µl mediante un factor de conversión proporcionado.

Aplicaciones

Los kits de cuantificación de ADN residual QIAcuity son ideales para la cuantificación de alta precisión del ADN de la célula huésped en intermedios de bioprocesos complejos.