Qiagen, 250284, kit dPCR PanCancer BRAF V600 FAM (200)

200 reacciones de 40 µl: incluye 20 ensayos BRAF V600 FAM, 20 ensayos de referencia AP3B1 HEX, agua y 4 mezclas maestras QIAcuity para la detección de 8 mutaciones BRAF V600 mediante QIAcuity

Características

- Detección paralela de mutaciones distintivas con frecuencias tan bajas como el 0,1 %
- El ensayo de referencia cuantifica las copias del genoma y verifica la eficiencia de la dPCR.
- Mutaciones de genes de referencia y distintivos detectadas en una sola ejecución utilizando dos colorantes diferentes
- Protocolo dPCR simple y rápido en QIAcuity
- Compatible con kits e instrumentos de preparación de muestras de QIAGEN

Detalles del producto

Los kits dPCR PanCancer se han diseñado para diversos genes diana relevantes para el cáncer. Con un solo ensayo, los kits pueden detectar múltiples mutaciones o deleciones en un gen diana. El kit dPCR PanCancer BRAF V600 FAM puede detectar ocho mutaciones clave en BRAF V600, y el kit dPCR PanCancer EGFRex19del FAM puede detectar 23 deleciones en el exón 19 del gen EGFR.

Cada kit dPCR PanCancer consta de dos cajas: una con el ensayo específico PanCancer, con cebadores específicos para cada gen marcados con FAM y un gen de referencia marcado con HEX para comprobar la eficiencia de la PCR, y la otra con la mezcla maestra QIAcuity (véase la figura "Concepto del kit dPCR PanCancer"). Los cebadores y las sondas vienen premezclados en las concentraciones adecuadas.

El ensayo está optimizado para la nanoplaca QIAcuity de 26k de 24 pocillos, pero también son compatibles otros formatos de nanoplaca. El flujo de trabajo de dPCR fácil de usar de QIAcuity permite un cribado rápido, preciso y rentable de sus muestras.

Actuación

Alta sensibilidad en la detección de mutaciones

Los kits dPCR PanCancer se han desarrollado para satisfacer la necesidad de un cribado preciso y rápido de muestras de cáncer en sus proyectos de investigación. Los ensayos pueden detectar múltiples mutaciones en paralelo, con una frecuencia de mutación de hasta el 0,1 %, en diversos tipos de muestras utilizadas en la investigación del cáncer.

Detección paralela de múltiples mutaciones distintivas y genes de referencia

La placa QIAcuity Nanoplate 26k de 24 pocillos permite el análisis de 24 muestras en paralelo. Cada ensayo detecta varias mutaciones relevantes para el cáncer simultáneamente en un gen diana específico en un solo canal. Dado que el ensayo de referencia para AP3B1 incluye un colorante diferente al del ensayo para las mutaciones, la lectura puede realizarse utilizando dos canales diferentes en la placa QIAcuity, pero en el mismo pocillo de reacción, lo que permite ahorrar muestras valiosas y analizar más muestras en una misma placa (véanse las figuras «Detección precisa de mutaciones BRAF V600E en el estándar de referencia de ADN con el kit dPCR PanCancer BRAF V600 FAM» y «Detección precisa de la deleción del exón 19 del EGFR en el estándar de referencia de ADN con el kit dPCR PanCancer EGFRex19del FAM»).

Compatible con múltiples tipos de muestras y métodos de preparación de muestras.

Los kits dPCR PanCancer son compatibles con los dispositivos de recolección de muestras, kits de preparación e instrumentos de QIAGEN, lo que le permite satisfacer diversas necesidades de rendimiento, reproducibilidad y sensibilidad. Tanto si aísla su ADN manualmente con un kit de QIAGEN, como el kit QIAamp Circulating Nucleic Acid para cfDNA, los kits QIAamp DNA Blood para ADN sanguíneo o el kit QIAamp DNA FFPE Advanced para ADN FFPE, como si realiza el aislamiento de ADN automatizado con EZ2 Connect o QIAsymphony SP, los kits dPCR PanCancer son compatibles con todos ellos.

Principio

Los kits dPCR PanCancer – BRAF V600 FAM y EGFRex19del FAM – detectan múltiples mutaciones distintivas en el gen BRAF que codifica la proteína quinasa B-Raf y el gen EGFR que codifica el receptor del factor de crecimiento epidérmico, respectivamente.

Los ensayos están diseñados para su uso con la mezcla maestra QIAcuity y el sistema de PCR digital QIAcuity. Cada ensayo implica la amplificación por PCR de punto final dirigida a regiones genéticas específicas del gen cancerígeno relevante. El producto amplificado se detecta mediante sondas de hidrólisis fluorescentes específicas para la diana, lo que aumenta la especificidad del ensayo.

A continuación, se presenta una descripción detallada de las mutaciones cubiertas con los identificadores únicos de la base de datos COSMIC v99. Además, cada kit dPCR PanCancer incorpora un ensayo de referencia que cuantifica el gen humano de copia única AP3B1, lo que proporciona un punto de referencia para determinar las copias del genoma en la muestra. Si bien la configuración recomendada implica una placa QIAcuity Nanoplate de 26k y 24 pocillos, estos ensayos también son compatibles con otros tipos de placas QIAcuity Nanoplate, lo que ofrece versatilidad en las configuraciones experimentales. También puede descargar una tabla con un resumen de las plantillas de control positivo para los ensayos BRAF y EGFR PanCancer (consulte la sección de Recursos).

Aprenda el principio detrás de la PCR digital basada en nanoplacas QIAcuity aquí.

Procedimiento

El protocolo del kit dPCR PanCancer es sencillo y puede llevarse a cabo en cualquier laboratorio con el instrumento QIAcuity dPCR. Siguiendo las instrucciones del manual de usuario y el protocolo de inicio rápido, el usuario prepara la mezcla de reacción y la pipetea en la nanoplaca. Recomendamos usar la nanoplaca de 26k y mantener el software actualizado. El ADN aislado se añade a la mezcla maestra de sondas QIAcuity lista para usar y agua libre de nucleasas. Esta mezcla se alicuota en cada pocillo de la preplaca dPCR, que contiene conjuntos de cebadores y sondas de hidrólisis predispensados. Las mezclas de reacción se transfieren de la preplaca a los pocillos de la nanoplaca dPCR, que posteriormente se sellan y se transfieren al instrumento QIAcuity dPCR (véase la figura "Un flujo de trabajo sencillo y rápido basado en placas"). El instrumento QIAcuity dPCR automatiza completamente los pasos de partición, ciclado y obtención de imágenes siguiendo los parámetros preestablecidos. Dependiendo del protocolo de ciclado, los resultados de la ejecución de dPCR se pueden analizar utilizando el paquete de software QIAcuity en aproximadamente 2 horas.

Aplicaciones

Los kits dPCR PanCancer son ideales para detectar mutaciones o deleciones en ADN aislado de sangre, plasma, tejido fresco o FFPE, pero también son compatibles con otros tipos de muestras. Los ensayos son compatibles con el flujo de trabajo de QIAGEN y han sido validados mediante pruebas de laboratorio (véase la figura "Detección de mutaciones de BRAF V600 (A) y deleciones del exón 19 de EGFR (B) en ADN libre extraído de plasma sanguíneo mediante el kit dPCR PanCancer en la plataforma QIAcuity"). Se muestran los resultados de la extracción manual y automatizada de ADN y el posterior análisis mediante dPCR. Se demuestra la coherencia de los datos con el ADN extraído mediante diferentes métodos de preparación de muestras de QIAGEN.