Qiagen, 250322, Kit cuantitativo QIAcuity RCL

Este kit incluye: QIAcuity MasterMix, QN Internal Control DNA dPCR, QN IC Probe Assay, VSV-G Assay, control positivo y agua libre de ARNasa.

Características

- Mezcla maestra premezclada con controles positivos e internos para una fácil configuración y detección de lentivirus competentes para la replicación (RCL)
- Permite una detección sensible, rápida y precisa de RCL mediante el ensayo VSV-G
- Ensayo robusto para obtener resultados confiables en presencia de alto ruido de fondo sin dilución previa

Detalles del producto

El lentivirus (LV) es un vector viral ampliamente utilizado en terapias celulares y génicas. Sin embargo, eventos de recombinación poco frecuentes dentro de las secuencias plasmídicas utilizadas para generar LV pueden conducir a la formación de lentivirus con capacidad de replicación (RCL), que pueden infectar células no diana y replicarse, lo que supone importantes riesgos de seguridad. Para mitigar estos riesgos, las autoridades reguladoras exigen rigurosas pruebas de control de calidad para garantizar la ausencia de RCL durante todo el proceso de fabricación de lentivirus. 1

La detección precisa de RCL es esencial para la seguridad y eficacia de las terapias basadas en LV. La PCR digital, con herramientas como el kit QIAcuity RCL Quant, ofrece una sensibilidad y precisión inigualables en comparación con otros métodos, como la qPCR, lo que la convierte en la opción ideal para detectar RCL.

Actuación

- Resultados precisos sobre la ausencia o presencia de RCL basados ​​en la detección de secuencias del gen de la envoltura VSV-G ADN (glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular)
- Alta sensibilidad hasta 0,35 copias/µL (rango dinámico de 0,35 a 7500 copias/µL)
- Alta linealidad incluso en presencia de hasta 10 µg de gDNA sin necesidad de dilución previa
- Resultados reproducibles y flujo de trabajo de dPCR simplificado

El kit QIAcuity RCL Quant proporciona:

Principio

Aquí se describe el principio de la reacción dPCR en las nanoplacas.

El kit QIAcuity RCL Quant detecta la ausencia o presencia de RCL mediante la detección de secuencias del gen de la envoltura del ADN VSV-G (glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular). También funciona en conjunto con los ensayos de dPCR de terapia celular y génica QIAcuity para el flujo de trabajo de lentivirus, el sistema de PCR digital QIAcuity y las nanoplacas QIAcuity, ofreciendo un flujo de trabajo de dPCR rápido e integral, comparable a la qPCR, pero con una detección robusta de RCL en las muestras.

Procedimiento

El kit QIAcuity RCL Quant se suministra para 96 ​​reacciones y está optimizado para la detección de RCL mediante el ensayo VSV-G y un control interno con QIAcuity® MasterMix en reacciones multiplex en el instrumento QIAcuity de PCR digital (dPCR). Las dianas del ensayo VSV-G se detectan en el canal verde, mientras que el control interno se detecta en el canal amarillo. Ambos ensayos se suministran en una mezcla de cebador-sonda lista para usar. El kit QIAcuity RCL Quant es compatible con la enzima de restricción PvuII.

Aplicaciones

Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. (2020). Pruebas de productos de terapia génica humana basados ​​en vectores retrovirales para detectar retrovirus capaces de replicarse durante la fabricación del producto y el seguimiento de pacientes. (Guía para la industria). Recuperado de https://www.fda.gov/media/113790/download

El kit QIAcuity RCL Quant está diseñado para la detección altamente precisa de RCL en pruebas de liberación de lotes de células transducidas ex vivo.

Referencias