Qiagen, 290145, kit MeatTracker de mericon (96)

Para 96 ​​reacciones: PCR Assay Meat, ADN de control, mezcla maestra de PCR multiplex, tampón de dilución de ácidos nucleicos QuantiTect, agua sin ARNasa, solución de colorante ROX 50x

Características

- Identificación de carne altamente sensible y específica, basada en PCR simple en tiempo real
- Kits de identificación específicos para cada especie de carne disponibles
- Protocolo optimizado, tiempo de ejecución de PCR de 73 minutos en el QIAGEN Rotor-Gene Q
- Kit de aislamiento de ADN mericon dedicado disponible

Actuación

Ensayo: Número de catálogo
Número de reacciones: 96
Kit para ganado mericon: 292025
Kit de pollo mericon: 292035
Kit de cerdo mericon: 292015
Kit de ovejas mericon: 292065

Especie: Resultado
Ganado: +
Pollo: +
Cabra: +
Ganso: +
Caballo: +
Alce: +
Avestruz: +
Cerdo Jabalí: + +
Conejo: +
Ovejas: +
Turquía: +
Búfalo de agua: +
Maíz: -
Papa: -
Arroz: -
Soja: –
Trigo: -

El kit MeatTracker de mericon es un sistema listo para usar que permite la detección de fragmentos específicos de ADN de especies animales en alimentos, piensos y productos farmacéuticos mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real. Está diseñado para usarse con uno o más de los siguientes ensayos de identificación animal de mericon (consulte la tabla "Ensayos de identificación animal de mericon").

Especificidad: El kit mericon MeatTracker presenta una alta especificidad para el ADN de especies animales. El kit se probó con un amplio panel de inclusión de diversas especies de vertebrados y un panel de exclusividad de especies de no vertebrados. No se observó reactividad cruzada entre especies utilizando 2500 copias de ADN analizado (véase la tabla "Resultados de los experimentos de reactividad cruzada con el kit mericon MeatTracker").

Principio

La detección de especies animales mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se basa en la amplificación de una región específica del genoma de la especie en cuestión. En la PCR en tiempo real, el producto amplificado se detecta mediante sondas fluorescentes específicas de la diana que se unen a él. La acumulación del producto de PCR produce un aumento de la señal fluorescente de las sondas unidas. La monitorización de la intensidad de la fluorescencia durante la PCR (es decir, en tiempo real) permite detectar el producto de PCR acumulado sin tener que reabrir los tubos de reacción después de la PCR.

Las sondas de los ensayos de PCR mericon son oligonucleótidos específicos de secuencia con un fluoróforo y un grupo extintor unidos. El fluoróforo se encuentra en el extremo 5' de la sonda, y el grupo extintor, en el extremo 3'. Si la secuencia de ADN diana está presente, la sonda se escinde mediante la actividad exonucleasa 5'-->3' de la ADN polimerasa HotStarTaq Plus durante la fase de extensión de la PCR. Esto separa el fluoróforo y el grupo extintor, lo que resulta en una fluorescencia detectable proporcional a la cantidad de producto de PCR acumulado.

El conjunto de cebadores de PCR para cada ensayo es altamente específico y se dirige a una región de ADN única y conservada del genoma de la especie analizada, verificada bioinformática y experimentalmente. La reactividad cruzada se ha investigado bioinformáticamente y se ha probado exhaustivamente con un panel de dianas seleccionadas para cada ensayo de PCR de mericon. Cada ensayo puede detectar tan solo 10 copias de cada diana en una reacción.

Procedimiento

El ADN se extrae de una muestra de alimento o pienso mediante un kit de preparación de muestras específico. El kit DNeasy mericon Food de QIAGEN es apto para una amplia gama de matrices alimentarias, incluidas aquellas con alto contenido de inhibidores.

El ADN aislado y puro se analiza mediante un protocolo de PCR en tiempo real optimizado que arroja resultados en 73 minutos en el Rotor-Gene Q de QIAGEN. El protocolo también ha sido validado para su uso en otros cicladores de bloque térmico.

Los resultados se muestran como curvas de PCR fáciles de interpretar.